總膽固醇 (TC) 檢測試劑盒在生物研究中的應(yīng)用

總膽固醇（TC）包括游離膽固醇和膽固醇酯。組織中的總膽固醇是指組織中所有脂蛋白中所含的膽固醇的總和。EZMeta™總膽固醇（TC）比色法檢測試劑盒提供了一種簡單的方法，用于檢測血清、血漿、動(dòng)物組織、細(xì)胞和細(xì)菌等多種生物樣品中的TC濃度。在檢測過程中，酯酶催化膽固醇酯的水解，產(chǎn)生游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA）。然后，膽固醇氧化酶催化FC產(chǎn)生Δ4-膽甾酮和H2O2。進(jìn)一步，H2O2、4-氨基苯酚和苯酚過氧化物酶可以催化生成具有特征吸收峰位于500 nm處的紅色醌化合物，其顏色深淺與TC含量成正比。

艾美捷 總膽固醇 (TC) 檢測試劑盒：

貨號(hào)：D-AKC2220

規(guī)格：48T / 96T

儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存于4°C，避光，保存時(shí)間為12個(gè)月

適用樣品：血清、血漿、動(dòng)物組織、細(xì)胞、細(xì)菌

所需材料但不提供：

·能夠測量500 nm處吸光度的微孔板讀板儀或可見光分光光度計(jì)

·96孔板或微玻璃比色皿，精密移液器，一次性移液頭

·冰制冰機(jī)，冷藏離心機(jī)，水浴

·無水乙醇 ·勻漿器（用于組織樣品）

總膽固醇 (TC) 檢測試劑盒試劑準(zhǔn)備：

TC工作溶液：按照提供的使用方法直接使用。使用前將其平衡至37°C。儲(chǔ)存在4°C。

標(biāo)準(zhǔn)品：按照提供的使用方法直接使用。使用前將其平衡至室溫。儲(chǔ)存在4°C，避光。

標(biāo)準(zhǔn)曲線設(shè)置：將2 µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品用無水乙醇稀釋至下表所示的1、0.5、0.25、0.125、0.063、0.031 µmoL/mL。

總膽固醇 (TC) 檢測試劑盒樣品準(zhǔn)備：

注意：推薦使用新鮮樣品。若不能立即測定，樣品可以在-80°C下儲(chǔ)存一個(gè)月。

1. 動(dòng)物組織：稱取約0.1克組織，加入1 mL無水乙醇。在冰上均質(zhì)化。以8,000 g的速度離心10分鐘，溫度為4°C。使用上清液進(jìn)行測定，并將其放在冰上待測。

2. 細(xì)胞或細(xì)菌：收集5×10^6個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌放入離心管中，在離心后棄去上清液；加入1 mL無水乙醇，在冰浴中超聲處理細(xì)胞或細(xì)菌5分鐘（功率20%或200 W，超聲3秒，間隔7秒，重復(fù)30次）。以8,000 g的速度離心10分鐘，溫度為4°C。使用上清液進(jìn)行測定，并將其放在冰上待測。

3. 血清（血漿）樣品：直接進(jìn)行測試。注意：如果通過蛋白質(zhì)濃度計(jì)算含量，最好使用EZMeta™總膽固醇（TC）比色測定試劑盒對(duì)總蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。

總膽固醇 (TC) 檢測試劑盒典型數(shù)據(jù)：

注意：計(jì)算公式，包括推導(dǎo)過程和最終公式。這兩個(gè)公式完-全相等。建議使用粗體的簡潔計(jì)算公式作為最終公式。

1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為縱坐標(biāo)，ΔA標(biāo)準(zhǔn)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將ΔA待測值代入方程得到y值（µmoL/mL）。

2. 計(jì)算樣品中的TC含量

（1）根據(jù)樣品的新鮮重量

TC（μmol/g）= y ÷（W÷V提取）× n = y ÷ W × n

（2）根據(jù)蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

TC（μmol/mg蛋白）= y ÷ Cpr × n

（3）根據(jù)細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算

TC（μmol/10^4）= y ÷（細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量÷V提?。?nbsp;n = y ÷ 500 × n

（4）根據(jù)液體體積計(jì)算

TC（μmol/mL）= y × n

其中：W：樣品重量，克；V提取：添加的無水乙醇體積，1 mL；n：稀釋倍數(shù)；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌的總數(shù)，5×10^6。

該試劑僅用于科學(xué)研究領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途