Advanced BioMatrix 鼠尾膠原蛋白溶液，I 型，(2D 細(xì)胞培養(yǎng))的無菌操作要點

Advanced BioMatrix提供RatCol®膠原溶液，其高度純化的尾端膠原濃度約為4 mg/mL，pH值為3-4，并經(jīng)過無菌過濾。RatCol®約占97%的膠原為Ⅰ型膠原，其余為Ⅲ型膠原。RatCol®膠原的純度≥99%。SDS-PAGE電泳顯示膠原的典型α、β和γ條帶模式。實際的膠原濃度會印在產(chǎn)品標(biāo)簽和每個特定批次的分析證書上。RatCol®是通過酸提取工藝從0.2M醋酸緩沖液中提取得到的保留有無肽膠原。膠原鏈的兩端，即N-末端和C-末端的前肽區(qū)域，被保留。

Ⅰ型膠原是皮膚、骨骼、肌腱和其他纖維結(jié)締組織的主要結(jié)構(gòu)成分，與其他膠原蛋白不同之處在于其賴氨酸羥基化和低碳水化合物含量較低。雖然已經(jīng)鑒定出多種類型的膠原蛋白，但它們都由三肽鏈分子組成，呈三螺旋構(gòu)象。主要結(jié)構(gòu)（氨基酸序列）中的細(xì)微差異確定了不同類型之間的差異。主要結(jié)構(gòu)的氨基酸序列主要是以甘氨酸為每三個位置的重復(fù)基序，丙氨酸或4-羥基脯氨酸經(jīng)常位于甘氨酸殘基之前。Ⅰ型膠原是由兩個α1(I)鏈和一個α2(I)鏈組成的異源三聚體，在中性pH和37°C下自發(fā)形成三螺旋支架。

多細(xì)胞生物中的細(xì)胞生長、分化和凋亡的控制依賴于細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的粘附。鑒于Ⅰ型膠原是ECM的豐富組分，細(xì)胞在三維膠原凝膠中培養(yǎng)比傳統(tǒng)的二維系統(tǒng)更好地模擬體內(nèi)細(xì)胞環(huán)境。這已經(jīng)在多種細(xì)胞類型中得到證實，包括心臟和角膜成纖維細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞（HSCs）和神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞。一些疾病可以影響ECM的力學(xué)特性，而其他疾病狀態(tài)可能是由于ECM的密度或剛度變化引起的。由于Ⅰ型膠原是ECM張力特性的關(guān)鍵決定因素，三維膠原凝膠在機(jī)械傳導(dǎo)和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究中非常有用，涉及將機(jī)械信號轉(zhuǎn)化為生化信號的過程。

不同的膠原亞型被一組結(jié)構(gòu)和功能多樣的細(xì)胞表面受體所識別，這些受體識別膠原三螺旋。比較耳聞能詳的是膠原受體是整合素α1β1和α2β1。α1β1是平滑肌細(xì)胞上的主要整合素，而α2β1是上皮細(xì)胞和血小板上的主要形式。這兩種形式在包括成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在內(nèi)的許多細(xì)胞類型上表達(dá)。某些細(xì)胞類型還可能表達(dá)其他膠原受體，如糖蛋白VI（GPVI），它在血小板中介導(dǎo)粘附和信號傳導(dǎo)。其他膠原受體包括圓盤結(jié)構(gòu)域受體、白細(xì)胞相關(guān)的免疫球蛋白樣受體1以及曼諾糖受體家族的成員。這個產(chǎn)品是從大鼠尾腱中提取的膠原制備而成，并含有高單體含量。起始材料來自管理的Sprague Dawley大鼠群體，并使用符合cGMP的制造工藝進(jìn)行純化。該過程包含內(nèi)置的、經(jīng)過驗證的步驟，以確?？赡艽嬖诘碾貌《竞?span style="font-family: Calibri;">/或病毒污染物的滅活。該產(chǎn)品非常適用于涂覆表面，提供用于培養(yǎng)細(xì)胞的薄層制備。

艾美捷Advanced BioMatrix 鼠尾膠原蛋白溶液，I 型，4 mg/ml，20 mL（2D 細(xì)胞培養(yǎng)）（ABM-5056-20ML）：

儲存/穩(wěn)定性：該產(chǎn)品存放在2-10°C，并在冷凍凝膠包裝中運輸。請勿冷凍。產(chǎn)品標(biāo)簽和每個特定批次的分析證書上列有到期日期。當(dāng)產(chǎn)品按照指示處理和儲存時，到期日期有效。

涂層操作步驟：

注意：在制備和處理膠原和其他溶液的過程中，采用無菌操作以保持產(chǎn)品的無菌性。

1. 將所需體積的膠原溶液從瓶中轉(zhuǎn)移到稀釋容器中（如果需要）。使用無菌的0.1%醋酸溶液進(jìn)一步稀釋至所需濃度。典型的工作濃度范圍為50至100 μg/ml。

注意：使用這些建議作為指導(dǎo)，確定您的培養(yǎng)系統(tǒng)的最佳涂層條件。

2. 將適量稀釋后的Rat Tail膠原加入培養(yǎng)表面。

3. 在室溫或37°C下，蓋上，孵育1-2小時。

4. 孵育結(jié)束后，吸去任何剩余物質(zhì)。

5. 用無菌培養(yǎng)基或PBS仔細(xì)沖洗涂層表面，避免劃傷表面。

6. 涂層表面已準(zhǔn)備好使用。如果保持無菌性，也可以濕潤或風(fēng)干后存放在2-8°C。

僅用于科研，不可用于臨床診斷。

美國Advanced BioMatrix是3D組織培養(yǎng)、細(xì)胞檢測和細(xì)胞增殖等領(lǐng)域?qū)嶒灲鉀Q方案，在分離、純化、凍干、細(xì)胞培養(yǎng)和蛋白檢測、多肽粘附、附著因子、基質(zhì)硬度和其他3D matrix 產(chǎn)品開發(fā)方面有著豐富的經(jīng)驗。