即用型VitroCol，人去端膠原溶液涂層程序說明

VitroCol，人去端膠原溶液是一種 3 mg/ml I 型人去端膠原溶液，用于 2D 和 3D 細(xì)胞培養(yǎng)，或作為膠原蛋白標(biāo)準(zhǔn)品。 VitroCol 膠原蛋白由人類新生兒成纖維細(xì)胞自然分泌，然后經(jīng)過加工和純化，產(chǎn)生天然產(chǎn)生的人類膠原蛋白。 VitroCol 設(shè)定了純度標(biāo)準(zhǔn)（膠原蛋白含量 >99%）。 VitroCol 大約 97% 為 I 型人類膠原蛋白，其余為 III 型膠原蛋白。每個(gè)特定批次的濃度均在購(gòu)買每個(gè)產(chǎn)品時(shí)提供的分析證書上提供。 VitroCol 是可溶于 0.01 N HCl 的去端肽膠原，因此 pH 值為 2。當(dāng)涂覆表面、提供培養(yǎng)細(xì)胞薄層制劑或用作固體凝膠時(shí)，VitroCol 特別適合人類細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)。 VitroCol 人類膠原蛋白采用用戶友好的包裝提供，以便使用和儲(chǔ)存。 VitroCol 經(jīng)過無菌過濾，以即用型溶液形式提供。

艾美捷VitroCol，人去端膠原溶液（ABM-5007-20ML）儲(chǔ)存/穩(wěn)定性：

存放在2-10攝氏度，并在冷凍膠凍包裝中發(fā)貨。不要冷凍。產(chǎn)品標(biāo)簽和每個(gè)特定批次的分析證書上列有過期日期。當(dāng)產(chǎn)品按照指示進(jìn)行處理和存儲(chǔ)時(shí)，過期日期有效。注意事項(xiàng)和免責(zé)聲明本品僅供研發(fā)使用，不適用于人類或其他用途。請(qǐng)查閱有關(guān)危害和安全操作規(guī)程的材料安全數(shù)據(jù)表。

涂層程序說明：請(qǐng)將以下建議作為指導(dǎo)，以確定您培養(yǎng)系統(tǒng)的合適涂層條件。

1. 從瓶中取出所需量的膠原蛋白，放入稀釋容器中。

2. 將VitroCol®稀釋至約50至100 µg/ml（約1:30）的水中。也可以使用0.01N鹽酸溶液。

3. 輕輕攪拌混合物，直到完-全混合。

4. 向培養(yǎng)表面添加適量稀釋后的VitroCol®材料，確保整個(gè)表面都被涂層。

5. 在室溫下蓋好，孵育1-2小時(shí)。吸去任何剩余材料?；蛘撸３衷谑覝叵?，直到表面干燥。

6. 孵育后，吸去任何剩余材料。

7. 用無菌培養(yǎng)基或PBS仔細(xì)沖洗涂層表面，避免劃傷表面。

8. 涂層表面已經(jīng)可以使用。如果保持無菌狀態(tài)，也可以在2-8°C潮濕或風(fēng)干保存。

3D凝膠制備程序：

1. 緩慢地將冷卻的10倍PBS或10倍培養(yǎng)基的1份加入到冷卻的膠原溶液的8份中，輕輕攪拌。

2. 使用無菌0.1M氫氧化鈉將混合物的pH調(diào)整至7.0-7.5。仔細(xì)監(jiān)控pH調(diào)整（pH計(jì)、酚紅或pH試紙）。

3. 使用無菌水將最終體積調(diào)整為10份。

4. 為防止凝膠化，保持混合物的溫度在2-10°C。

5. 要形成凝膠，加熱至37°C。等待90至120分鐘使凝膠形成。

VitroCol，人去端膠原溶液部分文獻(xiàn)參考：

1. Grinnell, F., Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices. Trends Cell Biol., 13, 264-269 (2003).

2. Beningo, K.A., et al., Responses of fibroblasts to anchorage of dorsal extracellular matrix receptors. Proc. Natl. Acad Sci. USA, 101, 18024-18029 (2004).

3. Zaman, M.H., et al., Migration of tumor cells in 3D matrices is governed by matrix stiffness along with cell-matrix adhesion and proteolysis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103, 10889-10894 (2006).

4. Jiang, H., and Grinnell, F., Cell-matrix entanglement and mechanical anchorage of fibroblasts in three-dimensional collagen matrices. Mol. Biol. Cell, 16, 5070-5076 (2005).

5. Heino, J., The collagen receptor integrins have distinct ligand recognition and signaling functions. Matrix Biol., 19, 319-323 (2000).

6. Heino, J., The collagen family members as cell adhesion proteins. BioEssays, 29, 1001-1010 (2007).

7. Ivaska, J., et al., Cell adhesion to collagen-is one collagen receptor different from another? Conn. Tiss., 30, 273-283 (1998).