Advanced BioMatrix人重組原彈性蛋白粘附實(shí)驗(yàn)&制備步驟

彈性蛋白前體物Tropoelastin是彈性蛋白分子的前體。Tropoelastin通常不以其原生狀態(tài)存在，因?yàn)樗诩?xì)胞合成后立即發(fā)生交聯(lián)，并在被導(dǎo)出到細(xì)胞外基質(zhì)期間發(fā)生交聯(lián)。彈性蛋白存在于身體的許多組織中，包括皮膚、動(dòng)脈壁和韌帶。彈性蛋白聚集體負(fù)責(zé)皮膚、動(dòng)脈壁和韌帶的伸展特性，彈性蛋白與幾種遺傳疾病有關(guān)，包括松弛皮膚癥（皮膚彈性喪失）和彈性皮膚癥（類似于松弛皮膚癥，但皮膚真皮層中有葡萄狀彈性蛋白聚積）。彈性蛋白賦予組織和器官?gòu)?qiáng)度和彈性。這種蛋白質(zhì)的異常和高度特征性的氨基酸組成使其具有很強(qiáng)的疏水性。它含有三分之一的甘氨酸氨基酸和幾種賴氨酸衍生物，這些賴氨酸衍生物用作蛋白單體之間的共價(jià)交聯(lián)。因此，彈性蛋白是一個(gè)三維網(wǎng)絡(luò)，兩個(gè)交聯(lián)點(diǎn)之間有60-70個(gè)氨基酸。這種分子結(jié)構(gòu)對(duì)其彈性特性、不溶性和抗蛋白水解作用起決定作用。Advanced BioMatrix的人源Tropoelastin是通過(guò)重組加工方法獲得的。該產(chǎn)品以無(wú)菌、凍干粉末的形式提供，每支含1毫克。

艾美捷人重組原彈性蛋白，1 mg #ABM-5052-1MG特性鑒定/純度：

使用電泳（SDS-PAGE）定性評(píng)估彈性蛋白的身份和純度。

數(shù)量：彈性蛋白以1毫克裝在凍干粉末瓶中供應(yīng)。

無(wú)菌性：無(wú)生長(zhǎng) - 最終產(chǎn)品通過(guò)低劑量電子束輻射終端滅菌。

內(nèi)毒素：<10 EU/ml存儲(chǔ)：該產(chǎn)品在溶解前存儲(chǔ)在-20°C，并在冷凍膠冰包裝中發(fā)貨。建議在重新溶解后將產(chǎn)品存儲(chǔ)在2-10°C。

穩(wěn)定性：產(chǎn)品在-20°C存儲(chǔ)時(shí)的貨架壽命為24個(gè)月。在重新溶解后，產(chǎn)品在2-10°C存儲(chǔ)時(shí)的貨架壽命為3個(gè)月。

人重組原彈性蛋白細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)：

為展示生物活性，將人體真皮成纖維細(xì)胞播種在涂有彈性蛋白的表面上，在無(wú)血清條件下。所有表面都用含有1%牛血清白蛋白（BSA）的溶液阻斷。細(xì)胞然后被允許在37°C下附著一個(gè)小時(shí)。結(jié)果顯示彈性蛋白具有顯著的細(xì)胞附著生物活性。對(duì)照表面只顯示出極少的細(xì)胞附著。

注意事項(xiàng)和免責(zé)聲明：本產(chǎn)品僅供研發(fā)使用，不適用于人類或其他用途。請(qǐng)查閱材料安全數(shù)據(jù)表以獲取有關(guān)危害和安全操作規(guī)范的信息。

人重組原彈性蛋白制備步驟：

1. 向含1毫克彈性蛋白的血清瓶中加入1毫升無(wú)菌0.25%冰醋酸溶液。

2. 輕輕混合至物質(zhì)完-全溶解。溶液可能仍然略顯混濁。

3. 如有需要，將所需量的溶液從血清瓶轉(zhuǎn)移到稀釋容器。使用無(wú)菌0.25%冰醋酸溶液進(jìn)一步稀釋至所需濃度。典型的工作濃度范圍可從1到50 μg/ml不等。注意：將這些建議作為指導(dǎo)，確定您培養(yǎng)系統(tǒng)的合適涂層條件。

4. 向培養(yǎng)表面加入適量稀釋后的彈性蛋白物質(zhì)。

5. 在室溫或37°C下覆蓋孵育1-2小時(shí)。

6. 孵育后，吸去任何剩余物質(zhì)。

7. 用無(wú)菌dH2O小心沖洗涂層表面，避免劃傷表面。

8. 涂層表面已經(jīng)可以使用。如果保持無(wú)菌性，也可以在2-10°C濕潤(rùn)或風(fēng)干保存。注意：為保持無(wú)菌性，在層流罩中采用無(wú)菌技術(shù)進(jìn)行所有操作。

人重組原彈性蛋白文獻(xiàn)參考：

J. Holst, S. Watson, M. Lord, S. Eamegdool, D. Bax, L. Nivison-Smith, A.Kondyurin, L. Ma, A. Oberhauser, A. Weiss & J. Rasko, “Substrate elasticityprovides mechanical signals for the expansion of hemopoietic stem andprogenitor cells", Nature Biotechnology Volume 28, Number 10, October2010, Pages 1123-1130.

Beth A. Kozel , Hiroshi Wachi§, Elaine C. Davis?, and Robert P. Mecham,Domains in Tropoelastin That Mediate Elastin Deposition in Vitro and in Vivo,J. Biol. Chem., Vol. 278, Issue 20, 18491-18498, May 16, 2003

艾美捷科技是Advanced BioMatrix的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。