BMA Biomedicals鈣顆粒蛋白B，MRP14，ELISA試劑盒測(cè)試原理

Peninsula Laboratories International, Inc.專門從事抗肽抗體和放射免疫分析領(lǐng)域，研究產(chǎn)品線包括為科研用戶提供高品質(zhì)的免疫學(xué)檢測(cè)試劑，如 ELISA 試劑盒、放免試劑盒、免疫熒光試劑盒及抗體相關(guān)輔助試劑等。Peninsula Laboratories International (PLI)和BMA Biomedicals 已合并。BMA和PLI 分別專注于它們?cè)诿庖呓M織化學(xué)和免疫測(cè)定中的應(yīng)用。

人類MRP8的分子量為11.0千道爾頓，而人類MRP14以13.3千道爾頓的形式存在，還有一種截短形式為12.9千道爾頓。Ca2+能夠誘導(dǎo)形成如下形式的異質(zhì)復(fù)合物：(MRP8)(MRP14)（簡(jiǎn)稱MRP8/14）、(MRP8)2(MRP14)和(MRP8/14)2。MRP8和MRP14上各自有兩個(gè)EF手型結(jié)構(gòu)域。MRP14對(duì)鈣的親和力比MRP8高，而且C末端的EF2結(jié)構(gòu)域的親和力高于N末端的EF1。C末端結(jié)構(gòu)域也主要決定了二聚體的特異性。EF2中的螺旋在鈣離子結(jié)合時(shí)會(huì)發(fā)生大的構(gòu)象變化，可能作為Ca2+誘導(dǎo)的構(gòu)象變化的觸發(fā)因素。MRP8/14的抗菌活性是由MRP14 C末端附近的多組氨酸序列通過螯合鋅引起的，并且可以通過Zn2+逆轉(zhuǎn)。兩個(gè)亞基本身都沒有顯示出抗菌活性，這表明Ca2+誘導(dǎo)的二聚體化導(dǎo)致多組氨酸序列的暴露發(fā)生了變化。Ca2+誘導(dǎo)的花生四烯酸和多不飽和脂肪酸與MRP8/14的結(jié)合可以通過添加Zn2+或Cu2+來防止，這是通過影響鈣依賴性脂肪酸結(jié)合口袋的構(gòu)象來實(shí)現(xiàn)的。在MRP8和MRP14的摩爾濃度相等時(shí)，以及每個(gè)EF手型結(jié)構(gòu)域的鈣離子數(shù)量大于3時(shí)，發(fā)生最大的脂肪酸結(jié)合。

艾美捷BMA Biomedicals-鈣顆粒蛋白B，MRP14，ELISA試劑盒（#S-1008）測(cè)試原理：

一步法非競(jìng)爭(zhēng)性?shī)A心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，試劑包含辣根過氧化物酶催化的四甲基聯(lián)苯胺顏色反應(yīng)，包括在多孔板閱讀器中450/630nm處的反應(yīng)停止和讀數(shù)。

提供的試劑：

S-1008A：即用型預(yù)包被并穩(wěn)定的微孔板 + 板蓋（各1個(gè)）。

S-1008B：500納克標(biāo)準(zhǔn)品，重組MRP14的穩(wěn)定凍干制劑。

S-1008D*：檢測(cè)緩沖液，3倍濃縮，輕微渾濁的藍(lán)色溶液。

S-1008E：0.48%四甲基聯(lián)苯胺，0.18% H?O?在乙醇/丙酮9:1中的溶液。需避光保存。

S-1008F*：TMB底物緩沖液（檸檬酸鉀）。

S-1008R*：試劑混合物：兩瓶1.1毫升（每瓶）的混合物，包含HRPO偶聯(lián)的檢測(cè)抗體，11倍濃縮。

*所有標(biāo)有星號(hào)(*)的液體溶液都含有0.1%（體積/體積）的Kathon CG作為防腐劑。試劑盒在冷藏條件下至少穩(wěn)定至標(biāo)示的日期。

未提供的物料：停止溶液（1N硫酸）、用于稀釋的塑料管；用于洗滌的等滲鹽水、移液管、可重復(fù)吸取的移液管、8通道移液管（2個(gè)）、微孔板洗滌器和閱讀器（450nm/630nm濾光片）。

計(jì)算方法：

由重復(fù)測(cè)定形成的，樣本中的含量是通過微孔板計(jì)算軟件（例如Softmax，Molecular Device）或手動(dòng)借助標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算的。如果樣本稀釋超出標(biāo)準(zhǔn)范圍，應(yīng)該用適當(dāng)?shù)南♂尪戎匦逻M(jìn)行測(cè)定。

測(cè)試程序：

向每個(gè)孔中加入100微升稀釋后的試劑混合物（見上文）。如果您處理多列，使用可分配100微升的可重復(fù)吸取的移液管最為方便。 2a. 按照下文建議，向第1列和第2列的孔中分別加入50納克/毫升（“50"）至0.2納克/毫升（“0.2"）的標(biāo)準(zhǔn)品，每孔100微升。包括兩個(gè)空白對(duì)照孔（如果是用重復(fù)樣本工作的話），這兩個(gè)孔各加入100微升的檢測(cè)緩沖液。 2b. 向相應(yīng)的孔中加入100微升適當(dāng)稀釋后的樣本。

在濕潤(rùn)環(huán)境中室溫下孵育90分鐘。

用等滲鹽水洗滌板子3次。用柔軟的吸收紙拍干。此時(shí)稀釋TMB底物溶液，準(zhǔn)備好停止溶液和8通道移液管，以便及時(shí)停止顏色反應(yīng)。

向每個(gè)孔中加入200微升稀釋后的TMB底物溶液。在室溫下孵育4分鐘。在MRP14存在的地方會(huì)發(fā)生藍(lán)色顏色反應(yīng)。

通過向每個(gè)孔中加入100微升停止溶液來停止顏色反應(yīng)。顏色從藍(lán)色變?yōu)辄S色。注意：停止溶液含有1N硫酸，具有腐蝕性并會(huì)導(dǎo)致燒傷。如果接觸到眼睛，請(qǐng)立即用大量水沖洗并尋求醫(yī)療建議。

在大約15分鐘內(nèi)，如果可能的話，將參考波長(zhǎng)設(shè)置為630納米，讀取450納米處的吸光度。 建議的板子設(shè)置： 可以選擇以下板子排列方式，其中St50至St0.2是從50納克/毫升到0.2納克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，如上所述。Sa-1至Sa-38是重復(fù)樣本。Cont指的是已知MRP14含量的對(duì)照血清（試劑盒中不包含）。

艾美捷科技是BMA Biomedicals的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)