Ultra超敏-小鼠白蛋白試劑盒的操作要點(diǎn)與數(shù)據(jù)分析

ALB檢測(cè)試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA），用于測(cè)量小鼠的ALB生物樣本。如果ELISA要在預(yù)期用途之外使用，用戶可能需要優(yōu)化所述使用。

艾美捷小鼠白蛋白ELISA試劑盒（E-90AL）檢測(cè)原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）的原理在圖1中表示。在這種測(cè)定中，樣品中存在的白蛋白（ALB）與已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗ALB抗體反應(yīng)。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗ALB抗體。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的ALB形成復(fù)合物。經(jīng)過(guò)另一次洗滌步驟后，通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB），測(cè)定免疫吸附劑上結(jié)合的酶。結(jié)合的酶量與測(cè)試樣品中ALB的濃度直接相關(guān)；因此，450納米處的吸光度是測(cè)試樣品中ALB濃度的量度。測(cè)試樣品中ALB的量可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得出，并根據(jù)樣品稀釋進(jìn)行校正。

未提供的所需材料：

精密移液器（2微升至100微升），用于制備和分發(fā)稀釋液

試管

噴霧瓶或微孔板洗滌器/抽吸器

蒸餾水或去離子水

微孔板讀取器

用于制備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

樣本收集用的離心機(jī)

血漿收集用的抗凝劑

計(jì)時(shí)器

小鼠白蛋白ELISA試劑盒樣本收集和處理：

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)。處理和處置時(shí)遵循通用預(yù)防措施。

如果血液樣本出現(xiàn)凝固、嚴(yán)重溶血、脂血，或樣本完整性受到質(zhì)疑，請(qǐng)做記錄并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果。

以下列出的樣本收集和儲(chǔ)存條件僅供參考。尚未評(píng)估樣本穩(wěn)定性。

血清樣本 - 應(yīng)通過(guò)靜脈穿刺收集血液。血凝塊形成后通過(guò)離心分離血清。取出血清并立即進(jìn)行測(cè)定或分裝樣本并儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

血漿樣本 - 應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進(jìn)行離心。立即進(jìn)行測(cè)定或分裝樣本并儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

尿液樣本 - 使用無(wú)菌或干凈的尿液收集器收集中段尿液。離心以去除細(xì)胞碎片。立即進(jìn)行測(cè)定或分裝樣本并儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

已知干擾物質(zhì) - 濃度高于0.1%的氮化物和硫柳汞會(huì)抑制酶反應(yīng)。

樣本稀釋：

測(cè)定要求在測(cè)試前對(duì)每個(gè)測(cè)試樣本進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行測(cè)定時(shí)，所有樣本都應(yīng)以雙份進(jìn)行測(cè)定。推薦的稀釋只是建議。稀釋應(yīng)基于未知樣本的預(yù)期濃度，使稀釋后的樣本落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)。如果不確定樣本水平，在運(yùn)行整個(gè)板之前，強(qiáng)烈建議對(duì)一個(gè)或兩個(gè)代表性樣本進(jìn)行系列稀釋。

血清樣本 - 推薦的起始稀釋為1/500,000。要準(zhǔn)備1/500,000的樣本稀釋，將2微升的樣本轉(zhuǎn)移到1998微升的1倍稀釋液中。這給出1/1,000的稀釋。接下來(lái)，將1/1,000的樣本通過(guò)轉(zhuǎn)移2微升到998微升的1倍稀釋液中進(jìn)行稀釋。這產(chǎn)生1/500,000的稀釋。每個(gè)階段都要c底混合。

血漿樣本 - 推薦的起始稀釋為1/500,000。要準(zhǔn)備1/500,000的樣本稀釋，將2微升的樣本轉(zhuǎn)移到1998微升的1倍稀釋液中。這給出1/1,000的稀釋。接下來(lái)，將1/1,000的樣本通過(guò)轉(zhuǎn)移2微升到998微升的1倍稀釋液中進(jìn)行稀釋。這產(chǎn)生1/500,000的稀釋。每個(gè)階段都要c底混合。

尿液樣本 - 推薦的起始稀釋為1/500。要準(zhǔn)備1/500的樣本稀釋，將2微升的樣本轉(zhuǎn)移到998微升的1倍稀釋液中。這給出1/500的稀釋。c底混合。

小鼠白蛋白ELISA試劑盒試劑準(zhǔn)備：

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）稀釋1/5。

洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）稀釋1/20。濃縮液在儲(chǔ)存溫度較低時(shí)可能會(huì)形成晶體。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體。

酶-抗體結(jié)合物 - 通過(guò)向每個(gè)微孔板測(cè)試條中添加10微升酶-抗體結(jié)合物到990微升1倍稀釋液中，計(jì)算每個(gè)微孔板測(cè)試條所需的工作結(jié)合物溶液量。使用前立即稀釋，并避光保存。均勻但輕柔地混合。避免起泡。

預(yù)涂覆ELISA微孔板 - 按提供狀態(tài)使用。打開箔袋，從袋中取出板。取出在測(cè)定中不會(huì)使用的所有的條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑。

小鼠ALB校準(zhǔn)液 - 根據(jù)批次特定的分析證書進(jìn)行準(zhǔn)備。