ADI猴IgM ELISA試劑盒標(biāo)本的采集和處理方案

ADI猴IgM ELISA試劑盒標(biāo)本的采集和處理：

通過靜脈穿刺采集血液，使其凝固，并在室溫下離心分離血清溫度。不要加熱使血清失活。如果血清沒有立即檢測(cè)，請(qǐng)儲(chǔ)存冷藏長(zhǎng)達(dá)2周或冷凍長(zhǎng)期儲(chǔ)存。避免凍融循環(huán)。血漿的使用尚未進(jìn)行調(diào)查，但應(yīng)該是一個(gè)合適的檢測(cè)樣本。

艾美捷猴IgM ELISA試劑盒：

貨號(hào)：ADI-7060

特異性：本試劑盒中使用的抗體已通過免疫電泳和ELISA證明能特異性地與IgM反應(yīng)，并且與IgG、IgA、IgE或其他任何猴血清蛋白幾乎沒有反應(yīng)性。

以下物種的血清在1:400稀釋下沒有顯示出顯著的反應(yīng)性：

小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、牛、豬、馬、羊、山羊、狗、貓、兔子或雞；還有10%的新生牛血清。人血清顯示出廣泛的交叉反應(yīng)性。

正常范圍：對(duì)14只個(gè)體恒河猴、食蟹猴和狒狒的儲(chǔ)存血清中的IgM進(jìn)行檢測(cè)，其范圍從0.2到3.8 mg/ml（中位數(shù)=1.85 mg/ml）。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定其自身測(cè)試群體的預(yù)期值。

精確度：含有低、中、高濃度IgM的樣本，代表3個(gè)不同物種，在同一個(gè)檢測(cè)中多次檢測(cè)（n=10）以提供檢測(cè)內(nèi)的精確度，并作為多個(gè)檢測(cè)中的重復(fù)樣本（n=5）以獲得檢測(cè)間的可重復(fù)性。使用點(diǎn)對(duì)點(diǎn)曲線擬合程序計(jì)算濃度的變異系數(shù)。

IgM濃度的測(cè)量顯示出良好的檢測(cè)內(nèi)（5.3至7.8% CV）和檢測(cè)間（4.2至16.2% CV）的可重復(fù)性。

檢測(cè)程序：

將所有試劑平衡至實(shí)驗(yàn)室溫度（18-30攝氏度）至少30分鐘。

稀釋血清樣本至工作樣本稀釋液中。對(duì)于大多數(shù)正常的猴血清，大約4000倍的稀釋是合適的。為了準(zhǔn)確性，推薦進(jìn)行兩個(gè)稀釋步驟，如下：

1) 10μl血清 + 990μl稀釋液 = [1:100]，

2) 25μl [1:100] + 975μl稀釋液 = [1:4000]。

不要稀釋標(biāo)準(zhǔn)品或陽性對(duì)照血清。

結(jié)果計(jì)算：

1. 結(jié)果可以使用任何免疫分析軟件包來計(jì)算。推薦使用四參數(shù)曲線擬合。如果沒有軟件可用，可以按照以下方法確定IgM濃度：

2. 計(jì)算重復(fù)樣本的平均OD值。

3. 在坐標(biāo)紙上，將標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值（y軸）與IgM的濃度（ng/ml）（x軸）作圖。通過這些點(diǎn)繪制最佳擬合曲線以構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的構(gòu)建是最常見和可靠的方法。

4. 可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的插值來確定未知樣本和對(duì)照中的IgM濃度。

5. 將樣本獲得的值乘以每個(gè)樣本的稀釋因子。

6. 對(duì)于產(chǎn)生高于1000 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)信號(hào)的樣本，應(yīng)進(jìn)一步稀釋并重新檢測(cè)。

注意事項(xiàng)和安全指南：

猴血清可能含有人畜共患的、跨物種的傳染性物質(zhì)。在處理含有血清的樣本（包括標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品）時(shí)，始終要戴手套，并把這些樣本和容器作為生物危害廢物進(jìn)行處理。

校準(zhǔn)液、樣品稀釋液和HRP標(biāo)記抗體含有溴硝基二氧六環(huán)（BND：0.05%，重量/體積）。

終止液含有稀釋的硫酸。請(qǐng)遵循良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范，避免任何試劑與皮膚、眼睛或黏膜接觸。所有試劑都可以用大量水沖入下水道。TMB、硫酸和BND的MSDS（材料安全數(shù)據(jù)表）可以從ADI網(wǎng)站索取或獲得：樣品稀釋液和抗蛋白G-HRP含有Proclin 300（0.05%，體積/體積）。

質(zhì)量控制：

準(zhǔn)確和可重復(fù)的檢測(cè)結(jié)果依賴于試劑和樣本的正確儲(chǔ)存、處理以及溫度控制。按照指示儲(chǔ)存所有試劑，并僅將用于檢測(cè)的試劑回暖至室溫。關(guān)鍵試劑和樣本的保質(zhì)期會(huì)因長(zhǎng)時(shí)間暴露在非冷藏條件下而縮短，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。

所有溶液應(yīng)清澈。渾濁或有顆粒物是試劑污染或不穩(wěn)定的跡象，可能會(huì)干擾檢測(cè)的正確進(jìn)行。如出現(xiàn)這種情況，請(qǐng)勿使用。

樣本對(duì)照品 試劑盒中提供了一個(gè)陽性血清對(duì)照品，并附有IgM濃度值范圍。在此范圍內(nèi)的回收率是檢測(cè)性能良好的指標(biāo)。

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)檢測(cè)內(nèi)部對(duì)照樣本，這些樣本代表實(shí)驗(yàn)室預(yù)期的樣本群體，并且是穩(wěn)定的。也應(yīng)該運(yùn)行一個(gè)樣品稀釋液陰性對(duì)照。

標(biāo)準(zhǔn)曲線 標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的信號(hào)應(yīng)該從低標(biāo)準(zhǔn)品到最高標(biāo)準(zhǔn)品連續(xù)增加OD值，且差異大于1.2 OD。

非連續(xù)增加或低信號(hào)可能表明技術(shù)、協(xié)議指導(dǎo)和/或試劑準(zhǔn)備、使用或穩(wěn)定性存在問題。陰性稀釋液對(duì)照的信號(hào)應(yīng)低于低標(biāo)準(zhǔn)品。不要依賴于存在這些問題的檢測(cè)結(jié)果。

技術(shù) 準(zhǔn)確和可重復(fù)的檢測(cè)結(jié)果依賴于良好的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，包括移液、板洗滌和樣本及試劑的處理。