ADI牛白蛋白（BSA）ELISA試劑盒結(jié)果計(jì)算方案

牛白蛋白ELISA試劑盒是一種用于定量牛血清白蛋白的夾心免疫測(cè)定試劑盒蛋白質(zhì)或抗體樣品、重組蛋白、細(xì)胞提取物中的血清白蛋白（BSA），培養(yǎng)細(xì)胞、培養(yǎng)基或任何其他暴露于牛的生物樣本血清或胎牛血清，并且可能含有痕量的BSA（宿主細(xì)胞蛋白或HCP）。到期由于試劑盒的高靈敏度和血清中白蛋白的高濃度，該試劑盒可能不會(huì)適用于測(cè)量血清中的白蛋白，或在BSA可能普遍存在的情況下，如測(cè)試環(huán)境中的污染物。建議使用ADI ELISA試劑盒#8000作為用于測(cè)量血清或其他含有高BSA的樣本中BSA的替代方法濃度。此套件僅供研究使用。

牛白蛋白（BSA）ELISA試劑盒檢測(cè)原理：

牛白蛋白ELISA試劑盒基于樣品中牛白蛋白與兩種抗體的結(jié)合抗體，一種固定在微量滴定孔上，另一種與辣根結(jié)合過氧化物酶（HRP）。洗滌步驟后，加入顯色底物并著色由HRP在TMB底物上的酶反應(yīng)產(chǎn)生，直接與樣品中存在的BSA的量成比例。停止解決方案已添加到終止反應(yīng)，然后使用ELISA微量滴定儀測(cè)量450nm處的吸光度好讀者。樣品中BSA的濃度根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算某種濃度的純化牛白蛋白。

艾美捷牛白蛋白（BSA）ELISA試劑盒：

貨號(hào)：ADI-8100

特異性：本試劑盒中使用的抗體已通過免疫電泳和ELISA證明能特異性地與牛血清白蛋白（BSA）反應(yīng)，并且與其他牛血清蛋白幾乎沒有反應(yīng)性。

在1%血清濃度下檢測(cè)以下物種的血清，顯示出的活性低于5 ng/ml：人、猴、羊、山羊、兔子、倉鼠、小鼠。

標(biāo)準(zhǔn)品的值分配：試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品濃度已校準(zhǔn)至Sigma Chemical的BSA標(biāo)準(zhǔn)品，貨號(hào)#P0914，以及Thermo Scientific的次級(jí)參考品，貨號(hào)#23209，這是對(duì)NIST BSA #927e的次級(jí)參考。

靈敏度：基于3次運(yùn)行中13個(gè)重復(fù)樣本的檢測(cè)，0.5ng/ml樣本的3倍標(biāo)準(zhǔn)差（SD）范圍與陰性樣本稀釋液的3倍SD范圍不重疊。

因此，牛血清白蛋白ELISA的靈敏度可以被認(rèn)為是250-500 pg/ml。

正常范圍：對(duì)來自四個(gè)不同來源的胎牛血清進(jìn)行檢測(cè)，顯示白蛋白濃度范圍為6.9至15.2 mg/ml。

精確度：含有低濃度和中等濃度BSA的樣本在多個(gè)檢測(cè)中作為重復(fù)樣本進(jìn)行檢測(cè)（n=5），以獲得檢測(cè)間的可重復(fù)性。

使用點(diǎn)對(duì)點(diǎn)曲線擬合程序計(jì)算濃度的變異系數(shù)（CVs）。

BSA濃度的測(cè)量顯示出良好的檢測(cè)間可重復(fù)性（5.7至9.7% CV）。

結(jié)果計(jì)算：

可以使用任何免疫分析軟件包來計(jì)算結(jié)果。推薦使用四參數(shù)曲線擬合。如果軟件不可用，可以按照以下方法確定牛血清白蛋白（Bovine Albumin）濃度：

1. 計(jì)算重復(fù)樣本的平均OD值。

2. 在坐標(biāo)紙上，將標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值（y軸）與牛血清白蛋白的濃度（ng/ml）（x軸）作圖。通過這些點(diǎn)繪制最佳擬合曲線以構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的構(gòu)建是最常見和可靠的方法。

3. 可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的插值來確定未知樣本和對(duì)照中的牛血清白蛋白濃度。

4. 將樣本獲得的值乘以每個(gè)樣本的稀釋因子。

5. 對(duì)于產(chǎn)生信號(hào)高于80 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品的樣本，應(yīng)進(jìn)一步稀釋并重新檢測(cè)。

所需材料及未提供的材料：

? 能夠提供100μl和1-10ml的移液器和移液管。推薦使用多通道移液器。

? 用于稀釋樣本和抗BSA-HRP濃縮液的一次性玻璃或塑料5-15ml試管。

? 用于稀釋洗滌液濃縮液和樣本稀釋液濃縮液的量筒；200ml至1L，存放瓶。容器絕不能用于測(cè)量含有BSA的試劑。

? 用于稀釋試劑濃縮液的蒸餾水或去離子水。

注意事項(xiàng)和安全指南：

標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品、樣本稀釋液和HRP抗體含有溴硝基二氧六環(huán)（BND：0.05%，重量/體積）。終止液含有1%硫酸。請(qǐng)遵循良好的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范，避免任何試劑與皮膚、眼睛或黏膜接觸。所有試劑都可以用大量水沖入下水道。

如果MSDS（材料安全數(shù)據(jù)表）尚未存檔，可以向ADI網(wǎng)站索取或獲得TMB、硫酸和BND的MSDS。

樣本收集和處理：

培養(yǎng)基、細(xì)胞提取物、重組蛋白或其他生物流體在適當(dāng)稀釋以避免溶液基質(zhì)干擾的情況下可以用作樣本。尚未研究螯合劑（尿素、鹽酸胍等）、洗滌劑（NP40、SDS等）、高鹽濃度或低或高pH值的影響。含有這些試劑的樣本應(yīng)稀釋在工作樣本稀釋液中以避免檢測(cè)干擾。高濃度BSA標(biāo)準(zhǔn)品可以與稀釋后的樣本混合，以評(píng)估適當(dāng)?shù)?span style="font-family: Calibri;">BSA回收率。