人拓?fù)洚悩?gòu)酶I ICE檢測試劑盒（無抗體）直接分離DNA/topo復(fù)合物

人拓?fù)洚悩?gòu)酶I ICE檢測試劑盒（無抗體）：

TopoGEN在拓?fù)洚悩?gòu)酶靶向細(xì)胞篩選方面擁有豐富的經(jīng)驗。TopoGEN科學(xué)家團隊開發(fā)并發(fā)表了一種檢測活細(xì)胞中共價拓?fù)洚悩?gòu)酶/基因組DNA復(fù)合物的方法（1,2），該方法在該領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。該方法稱為ICE測定（體內(nèi)酶復(fù)合物），最初需要CsCl梯度來純化基因組DNA和特異性拓?fù)洚悩?gòu)酶抗體，以檢測DNA組分中捕獲的拓?fù)洚愲摹＿@種方法雖然強大，但速度慢，勞動強度大，需要大型昂貴的設(shè)備。TopoGEN修改了該技術(shù)，允許在一步中直接分離DNA/topo復(fù)合物，省略了CsCl梯度步驟，并迅速提高了該方法的通量（見下圖）。

特異性的關(guān)鍵是使用TopoGEN的高度定向抗體試劑來檢測復(fù)合物。ICE檢測可以在一天半內(nèi)進(jìn)行，第二天一早就能看到結(jié)果。只要進(jìn)行適當(dāng)?shù)目刂撇⑹褂脝翁禺愋钥贵w試劑，幾乎可以在任何細(xì)胞或組織系統(tǒng)上進(jìn)行分析。最后，該分析不再局限于每次運行6個樣本（對于超速離心機轉(zhuǎn)子），因此可以實現(xiàn)更大的通量。TopoGEN的新ICE方法快速方便，可用于任何拓?fù)洚悩?gòu)酶靶標(biāo)（I、II、III）。

高通量體內(nèi)酶復(fù)合物（ICE）測定，用于測量內(nèi)源性拓?fù)洚悩?gòu)酶/基因組DNA共價復(fù)合物。一天的程序不需要CsCl離心步驟。ICE檢測試劑盒具有拓?fù)涮禺愋裕驗?span style="font-family: Calibri;">TopoGEN提供與拓?fù)?span style="font-family: Calibri;">/DNA復(fù)合物相對應(yīng)的抗體。

艾美捷人拓?fù)洚悩?gòu)酶I ICE檢測試劑盒（無抗體）（#TopoGEN-TG1020-0）內(nèi)容：

拓?fù)洚悩?gòu)酶ICE檢測試劑盒中包含足夠進(jìn)行24次檢測的材料（每次檢測需要一個60毫米的培養(yǎng)皿）。

特定抗體為每個試劑盒定義目標(biāo)酶。

1、喜樹堿（隨拓?fù)洚悩?gòu)酶I試劑盒提供）：凍干粉；用0.25毫升DMSO重懸以制備10 mM的庫存溶液。

2、依托泊苷（隨拓?fù)洚悩?gòu)酶IIα和IIβ試劑盒提供）：凍干粉；用0.25毫升DMSO重懸以制備10 mM的庫存溶液。

3、用于裂解和DNA制備的A-E緩沖液。

4、每個試劑盒都配有特定的抗體：

無抗體（客戶自備）（目錄號TG1020-0）

針對人拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抗體（目錄號TG1020-1）。

針對人拓?fù)洚悩?gòu)酶IIα的抗體（目錄號TG1020-2a）

針對拓?fù)洚悩?gòu)酶IIβ的抗體（目錄號TG1020-2b）

針對拓?fù)洚悩?gòu)酶IIIα的抗體（目錄號TG1020-3a；包含拓?fù)洚悩?gòu)酶I抗體對照）。

針對拓?fù)洚悩?gòu)酶IIIβ的抗體（目錄號TG1020-3b；包含拓?fù)洚悩?gòu)酶I抗體對照）。

*由于沒有經(jīng)過驗證的拓?fù)洚悩?gòu)酶IIIα或β的毒物，我們包含拓?fù)洚悩?gòu)酶I作為對照。通過包含拓?fù)洚悩?gòu)酶I抗體和喜樹堿，您可以確保ICE檢測按預(yù)期工作。

TG1020-1REF說明：

作為TopoGEN人類拓?fù)洚悩?gòu)酶ICE檢測試劑盒的配套對照/參考，TopoGEN提供方便的內(nèi)部控制，以有效評估和驗證結(jié)果。該參考文獻(xiàn)是從用喜樹堿處理的細(xì)胞和相應(yīng)的陰性藥物對照制備的基因組DNA。TG1020-1REF產(chǎn)品具有非常高的+藥物：無藥物基因組DNA（來自Hela細(xì)胞）的比例，對應(yīng)于理想的ICE Delta（或ICE-D）。該參考對照DNA是人類Top共價復(fù)合物ICE檢測試劑盒的配套產(chǎn)品。TopoGEN實際上提供了兩種基因組DNA參考：一種來自未經(jīng)處理的人類細(xì)胞，另一種來自用喜樹堿（30分鐘2.5μM）處理的人細(xì)胞。如果您以前從未進(jìn)行過ICE檢測，這些REFS將幫助您在自己的實驗室中快速有效地建立檢測。

樣本數(shù)據(jù)顯示了REF標(biāo)記DNA的特異性（用單克隆抗體檢測人Top的印跡）。產(chǎn)品中包含兩種基因組DNA（NEG和POS或陰性CPT和陽性CPT處理的基因組DNA）。還顯示了VP16處理的對照（未包括在內(nèi)），顯示該測定對Top的反應(yīng)與預(yù)期一致。

人拓?fù)洚悩?gòu)酶I ICE檢測試劑盒（無抗體）文獻(xiàn)參考：

1.  Subramanian, D., Furbee, C. and Muller, M. (2000) ICT Bioassay:  Isolation of In Vivo Complexes of Enzyme to DNA.  DNA Topoisomerase Protocols Vol. II: Enzymology and Drugs.  Humana Press.

2.  Subramainian, D., Kraut, E., Staubus, A., Young, D., and Muller, M.T. (1995) Analysis of Topoisomerase I DNA complexes in patients administered topotecan.  Cancer Research 55:2097-2103.