一氧化氮檢測試劑盒（微板法）

一氧化氮檢測試劑盒（微板法）是用于一管式雙鏈 cDNA 合成的試劑盒。cDNA *鏈合成的原理
是以 OligodT 為通用引物的、MMLV 催化的逆轉錄反應。

一氧化氮檢測試劑盒（微板法）原理如下：
cDNA 第二鏈合成的原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 雜合鏈中的 RNA
產生切口，再用 DNA Polymerase I 通過切口平移(nick translation)反應進
行 RNA 鏈取代合成 cDNA 第二鏈，其原理圖如下：
具有下列特點：
1. 即開即用，含有合成兩條 cDNA 鏈的所有試劑。
2. 適用于含 poly rA 的 RNA，對不含 poly rA 的 RNA（如細菌 RNA），
不能使用本試劑盒制備 ds cDNA。
3. 一管式進行，*鏈 cDNA 合成后不需要任何處理，直接進入第二鏈
的合成。
4. 所得雙鏈 cDNA 可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、
cDNA 文庫構建、抑制性差減雜交等。
5. 本試劑盒足夠 10 次 80uL 體系的雙鏈 cDNA 合成反應。
6. 如果需要合成全長 cDNA，zui選用 SMART 全長 cDNA 雙鏈合成
試劑盒。 規(guī)格及成分
成份 編號 10 次塑料盒包裝
Oligo dT 引物 100814 10 uL
cDNA *鏈合成緩沖液 130308A 40 uL
MMLV 逆轉錄酶（200U/uL） 60905 10 uL
5×cDNA 第二鏈合成緩沖液 130308B 160 uL
20×cDNA 第二鏈合成酶混合液 130308C 40 uL
T4 DNA 聚合酶 130808D 20 uL
0.2 M EDTA 溶液 130309 40 uL
超純水 100935 1 mL
使用手冊 1 份
運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。 自備試劑 mRNA 提取試劑盒
使用方法 一：mRNA 的制備
本試劑盒不提供 mRNA 提取試劑，用戶需自備相關試劑。
二：雙鏈 cDNA 的合成
1. 在一個干凈的塑料離心管中，按下表設置 cDNA 合成反應：
成分 用量
自備 mRNA 樣品 4 uL（0.5-2ug）
Oligo dT 引物 1 uL
70℃ 2 分鐘后室溫放置 2 分鐘，短暫離心
cDNA *鏈合成緩沖液 4 uL
MMLV 逆轉錄酶 1 uL
輕柔吹打混勻后 42℃保溫 90 分鐘合成*鏈 cDNA
超純水 48 uL
cDNA 第二鏈合成緩沖液 16 uL
cDNA 第二鏈合成酶混合液 4 uL
輕柔吹打混勻后，短暫離心，16℃保溫 2 小時
自備的 T4 DNA 聚合酶 2 uL
輕柔吹打混勻后，16℃繼續(xù)保溫 30 分鐘
0.2M EDTA 溶液 4 uL
注：如果不需要將雙鏈 cDNA 平末端化，則可以跳過 T4 DNA 聚合酶處理步
驟。
2. 電泳 5uL 檢測 cDNA 質量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范圍內呈模糊一
片，則 cDNA 合格。如果沒看見 cDNA 或有其他異常，需查找原因后再
繼續(xù)。
3. 所得 cDNA 可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、cDNA 文
庫構建、抑制性差減雜交等實驗。 關聯(lián)產品 SMART 全長 cDNA *鏈合成試劑盒、一管式 SMART 全長 cDNA 雙鏈合
成試劑盒