液體樣品蛋白純化回收試劑盒

液體樣品蛋白純化回收試劑盒專門用于對液體樣品進(jìn)行蛋白提取濃縮、脫鹽、脫去垢劑、脫還原劑等。
液體樣品蛋白純化回收試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1. 適用于各種液體樣品，包括蛋白溶液、胞漿提取液、胞核提取液、細(xì)胞或微生
物培養(yǎng)基上清液、血液、尿液、腦脊液等。也適于原代或傳代細(xì)胞懸液。
2. 靈敏，對一般蛋白樣品，zui低濃度可達(dá) 1ug/mL；對含 SDS 的樣品，zui低濃
度為 5 ug/mL。
3. 蛋白回收率 95-100%，遠(yuǎn)高于經(jīng)典的丙酮或三氯醋酸沉淀法，且可有效去除
樣品中的脂質(zhì)，不影響后續(xù) SDS-PAGE 和 Western Blot 等生物實(shí)驗(yàn)
4. 得到的蛋白質(zhì)可用于后續(xù)的 SDS-PAGE、免疫沉淀和質(zhì)譜分析等實(shí)驗(yàn)。但蛋
白已經(jīng)變性，沒有活性。
5. 能有效去除液體樣品中的鹽(1M)、還原劑(1%巰基乙醇或 DTT)、去垢劑
(5%SDS、1% Triton X-100、1% NP-40)和油脂等。
6. 操作方便迅速，只需要混勻后離心，不需要其他儀器。
7. 產(chǎn)品穩(wěn)定，可室溫長期放置。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 50 次小紙盒包裝
溶液 A 121208A 0.5mL
溶液 B 121208B 1 mL
溶液 C 121208C 50 mL
使用手冊 121208sc 1 份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。
自備試劑 1M Tris-HCl，pH8.8（也許會用到）
使用方法 使用方法一（用于不含 SDS 的液體樣品，但樣品蛋白濃度不能低于 1 ug/mL）
1、 將 100 μL 需要液體蛋白樣品轉(zhuǎn)移到一個(gè)自備的 1.5 mL 塑料離心管中。
2、 加入 10 μL 溶液 A，渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。
3、 冰上放置 15 分鐘。
4、 加入 10 μL 溶液 B，輕輕混勻。
5、 冰上放置 60 分鐘。
6、 4℃12000-15000×g 離心 10 分鐘。
7、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
8、 加入 1 mL 冰浴的溶液 C，震蕩混勻后 4℃12000-15000×g 離心 15 分鐘。
9、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
10、短暫離心，小心移棄殘留上清液后，將有蛋白沉淀的離心管敞開放置在冰上，
空氣晾干。一般需要 10 分鐘左右。
11、樣品放 4℃保存或立即電泳檢測。可直接用 1×SDS-PAGE 上樣液或其他電
泳緩沖液溶解蛋白沉淀，取適量上樣。如果藍(lán)色的溴酚藍(lán)染料變黃，則說明有
殘留酸性物質(zhì)污染，必須加少量自備的 1M Tris-HCl（pH8.8）緩沖液，直到
顏色變成藍(lán)色為止，否則將影響電泳結(jié)果。
使用方法二（用于含 SDS 的液體蛋白樣品，但樣品蛋白濃度不能低于 5 ug/mL）
1、 將 200 μL 液體蛋白樣品轉(zhuǎn)移到一個(gè)自備的 1.5 mL 塑料離心管中。
2、 加入 8 μL 溶液 B，渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。
3、 冰上放置 30 分鐘或-20℃放置 15 分鐘（過夜放置更好）。
4、 4℃ 12000-15000×g 離心 15 分鐘。
5、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
6、 加入 1 mL 冰浴的溶液 C，震蕩混勻后 4℃ 12000-15000×g 離心 15 分鐘。
7、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
8、 短暫離心，小心移棄殘留上清液后，將有蛋白沉淀的離心管敞開放置在冰上，
空氣晾干。一般需要 10 分鐘左右。
9、 樣品放 4℃保存或立即電泳檢測?？芍苯佑?1×SDS-PAGE 上樣液或其他電
泳緩沖液溶解蛋白沉淀，取適量上樣。如果藍(lán)色的溴酚藍(lán)染料變黃，則說明有
殘留酸性物質(zhì)污染，必須加少量自備的 1M Tris-HCl（pH8.8）緩沖液，直到
顏色變成藍(lán)色為止，否則將影響電泳結(jié)果。
技術(shù)資料 TCA 與蛋白質(zhì)
TCA 與蛋白質(zhì)之間主要有以下幾個(gè)方面的作用:①在酸性條件下與蛋白質(zhì)形成不溶
性鹽.②作為蛋白質(zhì)變性劑使蛋白質(zhì)構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出較多的疏水性基團(tuán)，使
之聚集沉淀.③隨著蛋白質(zhì)分子量的增大，其結(jié)構(gòu)復(fù)雜性與致密性越大，TCA 可能
滲入分子內(nèi)部而使之較難被*除去，在電泳前樣品加熱處理時(shí)可能使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
發(fā)生酸水解而形成碎片，而且隨時(shí)間的延長這一作用愈加明顯.④電泳圖譜顯示，
BSA，HSA 單體譜帶有較明顯的展寬現(xiàn)象，這可能是由于 TCA 的結(jié)合，使 SDS
與蛋白質(zhì)的結(jié)合量產(chǎn)生偏差，從而造成蛋白質(zhì)所帶電荷的不均一性，造成遷移率的
不*.我們認(rèn)為在電泳時(shí)使用 TCA 對蛋白質(zhì)樣品的濃縮或除鹽時(shí)，對于分子質(zhì)量
大的蛋白質(zhì)，要慎重選擇 TCA.對小分子量蛋白質(zhì)的濃縮，采用 TCA 時(shí)也有兩點(diǎn)
需要

注意:一是用 TCA 沉淀后，盡量用丙酮*抽提 TCA;二是樣品處理后要盡快
進(jìn)行電泳分析，以免發(fā)生聚集及斷裂，造成結(jié)果分析的不準(zhǔn)確.