詳細(xì)介紹
人細(xì)小病毒B19PCR檢測試劑盒引起的典型疾病是傳染性紅斑和急性關(guān)節(jié)病,但該病毒在一些血液病和免疫受損病人可引起再生障礙危象,在妊娠婦女可引起胎兒水腫乃至死胎。PCR 是檢測傳染性疾病的主流技術(shù),本產(chǎn)品就是以 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測人細(xì)小病毒 B19 的試劑盒
人細(xì)小病毒B19PCR檢測試劑盒具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)人細(xì)小病毒 B19 高度保守的 VP1 區(qū)設(shè)計(jì)。
5. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 規(guī)格及成分 成 份 編號 十孔盒包裝
PCR MagicMix 3.0(含染料) 90805 1 mL
細(xì)小病毒 B19 專一性引物對 Yw14051406 100 uL
陽性對照原液
(10E10 拷貝/uL)
Yw14071407 10 uL
超純水 100935 1 mL
使用手冊 11-3090sc 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。 自備試劑 樣品 DNA。 使用方法 一、樣品 DNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 DNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒
DNAout 或柱式病毒 DNAout 產(chǎn)品。
二、陽性對照
2、為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對
照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
3、用本試劑盒的陽性對照原液稀釋制備陽性對照工作液時(shí),由于陽性對照原液
濃度非常高,一定要注意不要污染本試劑盒的其他試劑和成分。zui在專門
的區(qū)域操作。陽性對照工作液的濃度不得低于 10 拷貝/uL,建議濃度為 1000
拷貝/uL。
三、PCR(25 uL 體系)
4、樣品管:在 PCR 管中加入下列成分:
成 份 樣品 陽性對照 陰性對照
細(xì)小病毒 B19 專一性引物對 2 uL 2 uL 2 uL
待測樣品 DNA 1-5 uL 無 無
陽性對照工作液 無 2 uL 無
補(bǔ)超純水到 12.5 uL 12.5 uL 12.5 uL
即用型 PCR Mix 3.0 12.5 uL 12.5 uL 12.5 uL
四、PCR 反應(yīng)參數(shù)
過程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 94℃ 5 min
PCR 反應(yīng)
(35 個(gè)循環(huán))
94℃ 0.5 min
50℃ 0.5 min
72℃ 0.5 min
zui后延伸 72℃ 10 min
五、電泳檢測
5、取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在 PAGE 或瓊脂糖凝膠上電泳(不需要使用 DNA 上樣液),zui使用 100 bp DNA Marker,產(chǎn)物的大小為 400 bp。 關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 綠如藍(lán)核酸染料預(yù)染配膠液
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