即用型熒光定量RT-PCR試劑盒

即用型熒光定量RT-PCR試劑盒是基于熒光染料檢測的即用型雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒，可以對靶片段進行實時定量 RT-PCR 分析（quantitative RT-PCR、qRT-PCR）。

即用型熒光定量RT-PCR試劑盒產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的
緩沖液組分、MMLV-Taq DNA 聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2 及新型熒光染料
DNAgreen 等所有一管式實時定量 RT-PCR 所需要的成分，用戶只需加入 RNA 模板和
引物即可進行實時定量 RT-PCR 反應，

具有廣泛的用途。
1. 一管式完成 qRT-PCR 反應，避免樣品交叉污染，尤其適合臨床應用。
2. 即開即用，用戶不需要單獨準備 qRT-PCR 所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個（RT-PCR buffer 和 MMLV-Taq Mix），將加樣步驟減少到zui低，
極大降低了加樣誤差，增加了可重復性。
4. 使用范圍廣，適用于從病毒 RNA 到人 RNA 的各種 RNA 模板。
5. 高靈敏度，每個 RT-PCR 體系zui低可以檢測 200 拷貝的 RNA 分子，可擴增的模版
RNA 的zui長達 2000 nt。
規(guī)格及成分 成 份 編 號
50 次
塑料袋包裝
300 次
塑料袋包裝
雙酶一管式 qRT-PCR Buffer，2× 750 uL 4.5 mL
MMLV-Taq Mix 100 uL 600 uL
RNase-free 水 80403 1 mL 6 mL
使用手冊 101219sc 1 份 1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存, 保存期限為一年。
自備試劑 RNA 模板、引物。有的機型需要自備 ROX。
使用方法
1. 在一干凈的無 RNase 的 PCR 管中，先加入下列成分（下面只列出樣品管的設置情
況，用戶可自己根據(jù)需要設置陽性和陰性對照）：
成分 樣品
自備 RNA 模板（分下面三種情況） 見下
總 RNA 100-500 ng
或 poly(A) mRNA 10-500 ng
或體外轉錄得到的專一 RNA 0.01 pg-500ng
RNA 特異性引物一（自備） 終濃度 300nM（注 1）
RNA 特異性引物二（自備） 終濃度 300nM
RNase-free 水 補到 10 uL
雙酶一管式 qRT-PCR Buffer（2×） 15 uL
自備 ROX（某些熒光 PCR 機型需要） 3 uL（注 2）
MMLV-Taq Mix 2 uL
注 1：通常初次使用本試劑時，可用引物濃度 300nM 進行實驗，根據(jù)實驗結果具體
情況，在 200～800nM 范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。引物、待檢樣品的具體加量用戶可以
根據(jù)實際情況調(diào)整，同時增減 RNase-free 水用量，保證總反應體積不變即可。
注 2：如果使用 ABI 公司的 7500，7700 和 7900 三種型號的熒光 PCR 儀器，則
需用自備的 ROX 進行 Ct 值校正。對 ABI 7700 和 7900，ROX 的*濃度為 1×
（即在每 30 uL 反應體系中加 3 uL 10×ROX）。對 ABI 7500， ROX 的*濃
度為 0.05-0.1×（每 30 uL 反應體系加 0.3 uL 10×ROX；也可將 10×ROX 稀
釋到 1×，然后每個反應體系加入 3 uL 1×ROX）。ROX 會在溶解曲線中產(chǎn)生噪音，
因此，如果出現(xiàn)了雜峰，將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項
取消打勾，然后重新分析數(shù)據(jù)。對于 iCycler IQ, MJ Opticon, MJ Chromo4,
MX3000, MX4000, RotorGene3000, RotorGene 6000 和 LightCycler 480 等
型號的熒光 PCR 儀器，ROX 不是必須的，但加入的話也不會影響整個 PCR 分析。
2. 輕柔混合均勻后放入 PCR 儀中進行熒光定量 RT-PCR。
3. 設定 RT-PCR 反應條件時，一般將 RT 的條件設定成 42℃ 30 分鐘，后接 94℃變
性 5 分鐘，然后進入 PCR 循環(huán)（PCR 參數(shù)將根據(jù)自備引物的 Tm 值和 PCR 產(chǎn)物
長度由用戶自行決定注）、zui后 72℃ 5 分鐘。并在退火或延長步驟中記錄熒光信號。
本產(chǎn)品中所含的熒光染料在沒結合 DNA 時，zui大吸收光譜在 471nm，結合 DNA
時的zui大吸收光譜在 500nm，zui大發(fā)射光譜在 530nm。
關聯(lián)產(chǎn)品 即用型熒光定量 PCR 試劑盒、PCR 級綠如藍染料。