游離脂肪酸含量(FFA)(酶法)試劑盒

游離脂肪酸含量(FFA)(酶法)試劑盒公司正熱銷的產(chǎn)品：人脛骨肉瘤細(xì)胞；U-2 OS品牌載玻片細(xì)胞CASPASE-8蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
乙酰蒲公英萜醇CAS:2189-80-2冰凍切片組織CASPASE-8蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
67656-30-8標(biāo)準(zhǔn)品石蠟切片組織CASPASE-8蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒
牛呼吸道合胞體病毒PCR試劑盒載玻片細(xì)胞CASPASE-8蛋白表達N

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、離心機、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

 

測定步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、 樣本測定

注意事項

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？

對照管的范圍是0.4-1。對照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

3. 樣品測定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。

注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。

4. 樣品中總SOD活力的計算：

a. 抑制百分率的計算：

參考如下計算公式計算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%

如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%

如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當(dāng)換算。

大鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)試劑盒過硫銨溶液(AP,10%)1,2-（EDB） 99%0.95

大鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒TEMED1,4-二溴丁烷 98% 分析標(biāo)準(zhǔn)品，95%

大鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)試劑盒TEMED1,5-二溴戊烷 98%黃豆苷原 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%

大鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)試劑盒溴酚藍水溶液(1%)1,6-二溴己烷 97%黃豆苷原 98%

大鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)試劑盒溴酚藍水溶液(2%)間二溴苯 97%靛 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥95%

大鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)試劑盒磷鹽-SDS電泳緩沖液(4×)溴代異戊烷 96%靛紅 95%

大鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)試劑盒CL蛋白抑制劑混合液(1mg/ml)溴乙酯 97%鬼臼素 98%

大鼠巨噬集落激因子(M-CSF)試劑盒苯磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)溴烷 >99.0%(GC)鬼臼素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>98%

大鼠巨噬集落激因子(M-CSF)試劑盒苯磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)三溴 AR,98%平 ≥99.0% (HPLC)

大鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)試劑盒苯磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)香柏油 FMP(顯微鏡用）東莨菪氫鹽 98%

大鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)試劑盒蛋白抑制劑混合液(100×PIC)代十六烷 97%粉防己 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%

大鼠巨噬炎性蛋白2(MIP-2)試劑盒乙酰(10mg/ml)烯酰, 96%,含~0.05% 噻吩穩(wěn)定劑維D3 98%

大鼠巨噬炎性蛋白2(MIP-2)試劑盒焦亞硫鈉溶液(100×)2-氨-6-吡啶 98%維D3 分析標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)試劑盒亮抑肽溶液(lepueptin,1mg/ml)乙烯酯 99%二茂鐵 99%

大鼠巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)試劑盒胰蛋白抑制劑溶液(1mg/ml)2-氨-5-吡啶 99%草二酯 CP，98%

大鼠質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)試劑盒 抑肽溶液(Aprotinin,2mg/ml)溴烯, 包含≤1000 ppm 氧化烯穩(wěn)定劑, 98%草二酯 GR，99%
游離脂肪酸含量(FFA)(酶法)試劑盒Src激活和信號分子蛋白抗體氧化石竹烯 CARYOPHYLLENE OXIDE(RG)Human, Mouse, Rat

腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白6結(jié)合蛋白抗體β-石竹烯/反式石竹烯 CARYOPHYLLENE, (-)-trans-(SG)Human, Mouse

B淋巴因1抗體長春質(zhì) CATHARANTHINE(RG)Human

T活化連接蛋白抗體兒茶酚 CAULOPHYLLOGENIN(AS)Human, Mouse, Rat

轉(zhuǎn)錄共激活因子TAZ抗體CATENARIN(RG)Human, Mouse, Rat

凝血(凝血子II)輕鏈抗體CATECHIN-5-O-GALLATE(SH)Human, Mouse

凝血(凝因子II)激活肽1抗體兒茶素沒食子酯 CATECHIN GALLATE, (-)-(SH)Human, Mouse, Rat

凝血(凝血II)激活肽2抗體兒茶素沒食子酯 CATECHIN GALLATE, (-)-(SH)Human, Mouse, Rat

Tafazzin蛋白抗體(+)-兒茶素 CATECHIN, (+)-(P) (AHP Verified)Human, Mouse