實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱:原代成纖維細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基
產(chǎn)品規(guī)格:100ml/500ml
貨號(hào):BJ-01X1946
保存溫度(℃):2-8℃/-20℃
運(yùn)輸溫度(℃):2-8℃/-20℃
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,公司產(chǎn)品僅用于科研由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
豬囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒靛紅溴化 GR鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液100ug/mL,體: 1%硝
豬畸胎瘤衍生生長(zhǎng)因子1(TDGF1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒靛紅溴化 光譜純SP鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液0.100μg/g,體:K+ 2.2mg/L,Na+ 23mg/L,Ca2+ 39mg/L
豬對(duì)氧磷3(PON3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 新橙皮苷溴化 99.95% metals basis,無(wú)水級(jí),粉末鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml
豬質(zhì)金屬蛋白17(MMP-17)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒新橙皮苷溴化 99.99% metals basis鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液 500mg/L,溶劑:1%鹽
豬色素P450氧化還原(CPR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 新橙皮苷溴化 FT-IR grade, ≥99.5%鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液100?g/ml,體: 1%硝
豬生長(zhǎng)分化因子9(GDF9)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒S-8大孔吸附樹脂 溴化 99.997% metals basis銫標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml
豬前列腺性磷(ACP3/PAP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒頭孢哌 溴化 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.94%六價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液 六價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml
豬膽囊收縮素/腸促胰肽B受體(CCKBR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 頭孢哌 氟化,無(wú)水 GR,粉末離子標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml
豬角質(zhì)轉(zhuǎn)谷氨酰(TGM1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒3,4-二羥氟化,無(wú)水 99.9% metals basis離子標(biāo)準(zhǔn)溶液500mg/L,溶劑:水
豬磷二酯4D(PDE4D)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒3,4-二羥鉻 AR離子(Cl-)標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000µg/mL,體:水
豬核孔蛋白107kda(NUP107)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒3,4-二羥鉻 CP離子(Cl-)標(biāo)準(zhǔn)溶液 100µg/mL,體:水
豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SPC)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒塞來(lái)西布鉻 GR鈰標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml
豬性唾液脯氨豐富蛋白2(PRB2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 塞來(lái)西布鉻 PT鈰標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,體:10%HNO3
豬腦環(huán)指蛋白(BFP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒塞來(lái)西布鉻 SP色度標(biāo)準(zhǔn)溶液 500度
豬谷氧還蛋白3(GLRX3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒塞來(lái)西布鉻 99.99% metals basis化學(xué)耗氧量(COD)-鉻法標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml
豬酰肽受體2(FPR2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒枯名鉻 ACS化物標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.000 g/L in H2O
原代成纖維細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基鈣粘蛋白相關(guān)蛋白受體BTR1抗體NADPH氧化1(NOX1)檢測(cè)試劑盒NOX1
有絲分裂蛋白BUB3抗體M型肌激(CKM)檢測(cè)試劑盒CKM
p60TRP蛋白抗體MAP激活化蛋白激2(MAPKAPK2)檢測(cè)試劑盒MAPKAPK2
博萊霉素水解抗體L選擇素(L-Selectin/CD62L)檢測(cè)試劑盒L-Selectin/CD62L
短蛋白聚糖抗體L-乳脫氫A鏈(LDH-A)檢測(cè)試劑盒LDH-A
BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體L苯丙氨解氨(PAL)檢測(cè)試劑盒PAL
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白12抗體Klotho(Klotho)檢測(cè)試劑盒Klotho
性亮氨拉鏈蛋白BZW1抗體KI-67抗原(MKI67)檢測(cè)試劑盒MKI67
骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B抗體I型膠原蛋白(COL-1)檢測(cè)試劑盒COL-1