郁金染料法PCR鑒定試劑盒說(shuō)明書(shū)

儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
    1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
    2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
    3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
    4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
   5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
   6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
阿里紅（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Lanthanum (III) chloride, hexahydrate產(chǎn)品別名: 3-甲磺酰氨基苯酸

阿魏（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Molybdic oxide產(chǎn)品別名: (3R,4R)-3-氨基-4-羥基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯

阿魏酸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： Papain 2x crystallized from papaya Latex產(chǎn)品別名: 二乙基二硫代氨酸鈉

阿魏酸乙酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Sodium benzenesulfonate產(chǎn)品別名: 4,4,5,5,5-五氟-1-戊

矮地茶（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Superoxide dismutase from Bovine Erythrocytes(SOD)產(chǎn)品別名: 3-氟-2-甲

艾黃素;六棱菊亭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： Triacontanol產(chǎn)品別名: 匹伐他汀鈣

艾葉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： 4-Hydroxybenzaldehyde產(chǎn)品別名: 6-溴-3,4-二氫-2H-異喹啉-1-酮

安格洛苷 C（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Albumin, from bovine pH 7.0 Low endotoxin產(chǎn)品別名: 2-氨基-6-氯苯

安石榴甙（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： Clostripain產(chǎn)品別名: 2-三氟甲基-

安五脂素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： dGMP, 2'-Deoxyguanosine-5'-monophosphate disodium salt產(chǎn)品別名: 順-六氫異吲哚林

安息香（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱(chēng)： L-Tartaric acid產(chǎn)品別名: 阿卡他定

澳茄新堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng)： N,N'-Dimethylurea產(chǎn)品別名: 4-咪唑哌啶

少突膠質(zhì)髓鞘相關(guān)蛋白抗體 ent-Voriconazole 質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：1%鹽酸

CDC42結(jié)合蛋白激酶α抗體（MRCKα） DL-Levothyroxine sodium 質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL(20°C)，基體:5%HCl

髓樣分化蛋白抗體 β-Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate sodium salt  質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基體：1.0 mol/L 硝酸

外周髓磷脂P0蛋白/P0蛋白抗體 Adenine Hemisulfate Dihydrate 質(zhì)量規(guī)格：100mg/L(20℃)，基體：1％HCl

褪黑素受體1A/松果體素受體1A抗體 9-(2-Hydroxyethyl)adenine 質(zhì)量規(guī)格：100µg/mL,,基體:1%HNO3

肌生成素抗體 3-Ethyl-d5-adenine 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml in 10%HCl

磷酸化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體 3-Methyl-d3-adenine 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml

DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體 Adenine-N1-Oxide 質(zhì)量規(guī)格：100µg/mL,基體: 1%HCl

磷酸化DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體 9-[2-(Hydroxypropyl-d6] Adenine 質(zhì)量規(guī)格：濃度范圍:0.959-1.01(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品
郁金染料法PCR鑒定試劑盒說(shuō)明書(shū)Corynebacterium variabileHuman PDE5A(cGMP-specific 3′,5′-cyclic phosphodiesterase) ELISA Kit僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

米根霉Human IFNGR1(Interferon gamma receptor 1) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus oryzae

薔薇放線孢Human SOX2(Transcription factor SOX-2) ELISA Kit僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

海洋青銅小單孢菌Human SHBG(Sex hormone-binding globulin) ELISA Kit用途: Produces restriction endonuclease MizI, antibiotic complex (U.S. Pat. 3,767,793), juvenimycin (4542).

玫煙色棒束孢Human FGF5(Fibroblast growth factor 5) ELISA Kit拉丁屬名: Isaria fumosorosea

大腸埃希氏菌Human TAC1(Protachykinin-1) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia  coli

赭色擲孢酵母Human HMGB1(High mobility group protein B1) ELISA Kit拉丁屬名: Sporobolomyces salmonicolor

廣東頸槽蛇菌Human SHBG(Sex hormone-binding globulin) ELISA Kit拉丁屬名: Gliocladiopsis guangdongensis

鹽地桿菌Human FGF5(Fibroblast growth factor 5) ELISA Kit拉丁屬名: Salinibacterium sp.