Agouti相關蛋白（AGRP）ELISA試劑盒說明書

試劑盒內包含了ELISA實驗所需的所有試劑和相關組份。簡單快捷的方案設計和優(yōu)化的試劑配比，為科研工作者提供ELISA實驗分析方案。
試劑盒內含有分析所需的所有必需試劑，操作簡單便捷；試劑盒內組分經實驗優(yōu)化，確保更高的檢測靈敏度
產品名稱：Agouti相關蛋白(AGRP)ELISA試劑盒說明書
英文名稱：AGRP ELISA Kit
規(guī)格：96T/48T
分析類型：夾心ELISA
樣本類型：血清、血漿、細胞上清等液體樣本
產品型式：96孔板，可拆
貯存方法：試劑盒未拆開，4℃保存。已拆開，標準品-20℃保存，其它4℃保存。
運輸條件：4℃
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組成：
1 30倍濃縮洗滌液      20ml×1瓶
2 酶標試劑                 6ml×1瓶
3 酶標包被板              12孔×8條
4 樣品稀釋液              6ml×1瓶
5 顯色劑A液               6ml×1瓶   
6 顯色劑B液               6ml×1/瓶  
7 終止液                     6ml×1瓶
8 標準品                     0.5ml×1瓶
9 標準品稀釋液           1.5ml×1瓶
10 封板膜                   2張
樣品收集、處理及保存方法
1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速 小心地分離。
2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
樣本要求 
1．樣本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
人肺鱗狀癌細胞；NCI-H226Cystatin A  胱抑素A/半胱氨酸蛋白酶抑制劑A抗體100 ul

人源口腔鱗狀細胞癌細胞系；TSCC1Cystatin C/CST3  胱抑素C/半胱氨酸蛋白酶抑制劑C抗體20 ul

肝癌細胞株 ；HepG2/TC155Cystatin B  胱抑素B/半胱氨酸蛋白酶抑制劑B抗體100 ul

人肺腺癌細胞；ZRLC-1PRODH  脯氨酸脫氫酶抗體100 ul

人舌癌細胞系；CTSC-3RAIDD  CASP2凋亡相關蛋白抗體100 ul

胃癌二甲雙胍耐藥細胞株；BGC823/二甲雙胍Cytoglobin  細胞球蛋白抗體100 ul

肝癌細胞株；LM3CYLD  微管結合蛋白CYLD抗體100 ul

人卵巢癌細胞；OV3R-PTXphospho-CYLD(Ser418)  磷酸化微管結合蛋白CYLD抗體20 ul

人卵巢癌細胞；SK3R-PTXCYP1A1  細胞色素P450 1A1抗體100 ul

人源性腎透明細胞癌細胞舒尼替尼耐藥株；7SuRP450 1A2/CYP1A2  細胞色素P450 1A2抗體100 ul

人源性腎透明細胞癌細胞舒尼替尼耐藥株；ACSuCYP11A1/P450SCC  細胞色素P450 11A1抗體20 ul

人肝內膽管癌細胞系；LICCFCYP2C9  細胞色素P450 2C9抗體100 ul

人肝癌細胞系；HCCIH01CYP11B1  細胞色素P450 11B1抗體20 ul

人肝癌細胞系；HCCIH02Cytochrome P450 2D1  細胞色素CYP2D1抗體100 ul

人肝癌細胞系；HCCIH03CYP3A4  細胞色素P450 3A4抗體100 ul

人源性腎透明細胞癌細胞舒尼替尼耐藥株；ACSuRCYP3A1  細胞色素P450 3A1抗體20 ul

曲妥珠單抗（赫塞?。┠退幍娜税┘毎?；BT-474/HRCYP4A1  細胞色素P450 4A1抗體100 ul

人肝癌細胞株；Huh-7/F24CYP5A1/Thromboxane synthase  血栓素合成酶抗體20 ul
Agouti相關蛋白(AGRP)ELISA試劑盒說明書ELK1/FITC  熒光素標記細胞轉錄因子ELK1IgG

Endo G /FITC  熒光素標記核酸內切酶GIgG

Phospho-ELk1 (Ser383) /FITC  熒光素標記兔抗、大、細胞轉錄因子ELK1IgG

Emp1/FITC  熒光素標記表皮膜蛋白1IgG

Endostatin/FITC  熒光素標記內皮抑素/內皮他丁IgG

envelope glycoproin Yellow fever virus/FITC  熒光素標記抗黃熱病毒包膜糖蛋白IgG

 Beta-endorphin/FITC  熒光素標記、大、、羊、牛beta內啡肽IgG

ENPP1/PC-1/FITC  熒光素標記抗核苷酸內焦酸酶/酸二酯酶1IgG

EGFL7/FITC  熒光素標記抗脈管發(fā)育(組裝)蛋白IgG
操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照隨貨說明書中圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。