實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱:L15基礎(chǔ)培養(yǎng)基細(xì)胞
英文名稱:L15
貨號(hào):BJ-01X1999
產(chǎn)品規(guī)格:500ml
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,公司產(chǎn)品僅用于科研由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
豬胰島素降解(IDE)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒聚乙烯吡咯烷橡膠PTFE墊片,配套120ZSS棕色瓶,φ20mm*1.4mm赫斯特?zé)晒馊剂希?3342 98%
豬肝脂 (LIPC)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒聚乙烯吡咯烷中空純四氟塞,配套120ZSS玻璃瓶,φ18*18胞內(nèi)鈣熒光探針BAPTA, AM 95%
豬補(bǔ)體片段3b(C3b)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 聚乙烯吡咯烷橡膠覆PTFE墊片,匹配30Zss黑色低蓋,φ18*1.52',7'-二-(2-羧乙)-5(6)-羧熒光素 90%
豬血紅蛋白β(HBβ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 1,3-二羥橡膠覆PTFE墊片,匹配500MLZPA棕色瓶低蓋,φ25.5*1.52',7'-二-(2-羧乙)-5(6)-羧熒光素乙酰酯1 mg/ml,溶劑:DMSO
豬α2纖溶抑制因子(α2-PI)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 1,3-二羥500ZPA四氟柱塞,匹配500MLZPA棕色瓶,Ф23*27.7 ,2',7'-二-(2-羧乙)-5(6)-羧熒光素乙酰酯Mixed isomers
豬促血管生成素1(ANG1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒1,3-二羥30ZSS中空四氟塞,φ16*17.36-羧熒光素 95%
豬剪切修復(fù)交叉互補(bǔ)因1(ERCC1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 1,3-二羥PTFE墊片,匹配2ml棕色螺紋玻璃瓶和瓶蓋,φ9*1.55-羧熒光素 95%
豬封閉蛋白3(CLDN3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 4-氨安替比林PTFE墊片,匹配3ml棕色螺紋玻璃瓶和瓶蓋,φ11.8*1.55-羧四羅丹明 95%
豬粒集落激因子受體(GCSFR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒4-氨安替比林白凡士林 醫(yī)用級(jí)5-羧熒光素琥珀酰亞酯 90%
豬蛋白酪氨磷受體J(PTPRJ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒4-氨安替比林黃凡士林 醫(yī)用級(jí)5(6)-羧熒光素 95%
豬促狀腺激素胚胎因子(TEF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒3-氨苯乙氫加蘭他敏 98%5(6)-羧熒光素琥珀酰亞酯 96%
豬活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 3-氨苯乙2,2,6-三-4H-1,3-二噁英-4- 90%6-羧熒光素琥珀酰亞酯 90%
豬糖皮質(zhì)激素受體α(GRα)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 3-氨苯乙Amberlite? IR-120陽離子交換樹脂 鈉型6-羧四羅丹明 for fluorescence, ≥90%
豬磷脂爬行1(PLSCR1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒4-氨苯乙Amberlyst® 15離子交換樹脂 濕6-羧四羅丹明琥珀酰亞酯 for fluorescence
豬甘露糖受體C1樣蛋白1(MRC1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 4-氨苯乙Amberlite® XAD16非離子型大孔樹脂 20-60 mesh4,’6-二脒-2-苯吲哚 98%
豬尿激型纖溶原激活因子受體(PLAUR/uPAR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒4-氨苯乙Amberlite XAD7HP 離子交換樹脂 Mesh 20-60二氫羅丹明123 95%
L15基礎(chǔ)培養(yǎng)基細(xì)胞過硫銨琥珀銨金精三羧銨
銨磷鉬銨磷二氫四丁銨
磷氫鈉銨硫銨硫代乙銨