實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱:Medium M3基礎(chǔ)培養(yǎng)基細(xì)胞
英文名稱:Medium M3
貨號(hào):BJ-01X10006
產(chǎn)品規(guī)格:500ml
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,公司產(chǎn)品僅用于科研由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
豬粘蛋白2(MUC2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒棕櫚油酯銅片 AR,99.5% metals basis雙環(huán)辛烯化銠二聚體 98%
豬自身免疫調(diào)節(jié)因子(AIRE)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒四庚溴化銨銅 SP(1,5-己二烯)銠(I),二聚體 98%
豬紅藻氨離子型谷氨受體2(GRIK2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 四庚溴化銨銅粒 99.99% metals basis,粒徑<5mm代三叔丁磷化金(I) 97%
豬膽磷甘油酯(PC/CPG)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 四庚溴化銨銅標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mg/l,水質(zhì)標(biāo)樣(三膦)金 98%
豬滑行蛋白β(TXLNb)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒四丁溴化銨超細(xì)球形銅粉 99.9%,D50(0.2~0.55μm) (二膦)化金 97%
豬唾液淀粉α1(AMY1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 四丁溴化銨銅粉 99.9% metals basis,200目(三苯膦)化金(I) 98%
豬補(bǔ)體成分4a(C4a)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒四丁溴化銨銅粉 99.8% metals basis,20μm氧(環(huán)辛二烯)銥(I)二聚體 96%
豬β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒四乙溴化銨納米銅粉 99.9% metals basis,10-30nm(1,1'-雙(二苯膦)二茂鐵)二化鎳 97%
豬骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白1(GREM1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒四乙溴化銨納米銅粉 99.9% metals basis,80-100nm1,2-雙(二苯膦)乙烷化鎳 98%
豬接頭蛋白2(ELMO2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒四乙溴化銨鈷 99.5%,300目2-(二環(huán)己膦)聯(lián)苯 98%
豬黑色素瘤相關(guān)抗原(MAGE)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒四乙化銨鎳 AR,99.5%2-二環(huán)己膦-2'-(N,N-二)-聯(lián)苯 98%
豬甘露糖受體(MR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 四乙化銨不銹鋼粉 200目二叔丁化膦 96%
豬過(guò)氧化還原2(PRDX2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒四乙化銨不銹鋼粉 200目二溴雙(三苯磷)化鎳 99%
豬絲氨/蘇氨激39(STK39)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 四乙化銨不銹鋼粉 200目(S, S)-環(huán)己二 98%
豬磷烯式羧激1(PCK1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒四乙化銨敵草隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%(R, R)-環(huán)己二 98%
豬多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒四乙化銨敵草隆 99%2-(二苯膦)苯 97%
Medium M3基礎(chǔ)培養(yǎng)基細(xì)胞含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族17抗體半乳糖6硫酯(Gal-6S)檢測(cè)試劑盒Gal-6S
含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族12抗體半胱氨天冬氨蛋白(caspase-3)檢測(cè)試劑盒caspase-3
鈉ATP通道蛋白抗體半胱氨蛋白抑制劑/胱抑素C(Cys-C)檢測(cè)試劑盒Cys-C
AGXT2L2蛋白抗體百白破抗體(DPT)檢測(cè)試劑盒DPT
β淀粉樣蛋白胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白1抗體白血病抑制因子受體(LIFR)檢測(cè)試劑盒LIFR
錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體白血病抑制因子(LIF)檢測(cè)試劑盒LIF
二磷腺苷核糖轉(zhuǎn)移3抗體白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)檢測(cè)試劑盒ALCAM
二磷腺苷核糖轉(zhuǎn)移5抗體白三烯E4(LTE4)檢測(cè)試劑盒LTE4
腺苷單磷脫氨1抗體白三烯D4(LTD4)檢測(cè)試劑盒LTD4