公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
白蛋白(ALB)含量試劑盒(帶標(biāo)準(zhǔn):溴甲酚綠法) | 48樣 | BJ-01S63596 |
自備儀器和用品:
酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水
粗酶液提取:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
注意事項(xiàng)
1、試劑三為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑三活性低,可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù);(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑三未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
c. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
3. 樣品測(cè)定:
a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分,注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。
注意:加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開(kāi)始,可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說(shuō)明:孵育25至35分鐘檢測(cè)出來(lái)的SOD活力無(wú)顯著差異,但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性,推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無(wú)450nm 濾光片,可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算:
a. 抑制百分率的計(jì)算:
參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率:
抑制百分率=[(A空白對(duì)照1-A空白對(duì)照2)-(A樣品-A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1-A空白對(duì)照2) × 100%
如果沒(méi)有設(shè)置空白對(duì)照3,則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為:
抑制百分率=(A空白對(duì)照1-A樣品) / (A空白對(duì)照1-A空白對(duì)照2) × 100%
如果計(jì)算出來(lái)的抑制百分率小于30% 或大于70% ,則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏高,則需適當(dāng)稀釋樣品;如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏低,則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。
b. SOD酶活力單位的定義:在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí),反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意:SOD的活力單位的定義方式有很多種,不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定
豬流行性腹瀉病抗體(PEDV)試劑盒乳脫氫(兔?。㎜-高苯氨 98%標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/m,u=6~2%,
豬傳染性胃腸炎病抗體(TGEV)試劑盒乳脫氫(兔?。?-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四脲六氟磷酯 99%嘧螨酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.6%
豬傳染性胃腸炎病抗體(TGEV)試劑盒膠原1-羥-7-偶氮苯并三氮唑 99%熱必斯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.3%
豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒膠原N-羥琥珀酰亞 98%氟喹唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品,97.5%
豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒膠原L-羥脯氨 99%雙氟磺草 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%
豬鏈球菌試劑盒膠原L-羥脯氨酯鹽鹽 98%alpha-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%
豬鏈球菌試劑盒膠原組 96%alpha-六六六標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%
豬戊型肝炎病抗原試劑盒膠原L-高胱氨 98%惡霉靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%
豬戊型肝炎病抗原試劑盒膠原Fmoc-β-Homogln(Trt)-OH 95%氟鈴脲 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%
豬乙型腦炎病抗原試劑盒膠原Fmoc-β-Homomet-OH 97%環(huán) 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%
豬乙型腦炎病抗原試劑盒膠原Fmoc-L-beta-高苯氨 95%吡嘧磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%
豬口蹄疫抗原試劑盒膠原Fmoc-L-beta-高纈氨 97%噻螨 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%
豬口蹄疫抗原試劑盒膠原N-CBZ-羥脯氨酯 95%噻螨標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%
豬瘟病抗原試劑盒膠原N(Α)-芐氧羰-D-組氨 98%噻螨標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%
豬瘟病抗原試劑盒膠原H-His(Trt)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh七標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2(劇品)
豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)試劑盒 膠原Fmoc-His(Trt)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB七標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=3%(劇品)
白蛋白(ALB)含量試劑盒(帶標(biāo)準(zhǔn):溴甲酚綠法)β-煙酰腺嘌呤二核苷磷鈉鹽Human
β-煙酰腺嘌呤二核苷 3'-磷鈉鹽水合物Human
Δ2-頭孢他啶Human, Mouse
Δ6,7-巴卡丁 IIIHuman
Δ8,9-脫氫雌激素Human
阿巴卡韋5'-β-D-葡萄糖苷Human, Mouse
阿巴卡韋5'-磷鹽Human
阿巴卡韋羧化物Human, Mouse
阿苯達(dá)唑砜Human, Mouse