實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱:澳洲胎牛血清細(xì)胞
英文名稱:FBS
貨號(hào):BJ-01X10015
規(guī)格:500ml
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,公司產(chǎn)品僅用于科研由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),*進(jìn)口來(lái)源,*保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
豬白分化抗原28(CD28)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒縮二脲鄰苯 97%三(2,4-二)磷化氫-5,5',5''-三磺三鈉鹽 98%
豬山梨脫氫(SDH)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒縮二脲鄰苯 99%三(4 -氧- 3 ,5 -二苯)膦 500mg
豬脯氨酰羧肽(PRCP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒蒽醌鄰苯 Standard for GC三(3-)膦 98%
豬補(bǔ)體因子8b(C8b)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 蒽醌鄰苯 99.0%三(4-)膦 98%
豬表皮轉(zhuǎn)谷氨酰(TGM3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒苊醌叔丁鋰 1.3M戊烷溶液雙(2-二苯膦乙)苯磷 97%
豬二氧化(DAO)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 苊醌代仲丁烷 99%反-N,N'-二環(huán)己烷-1,2-二 97%
豬蕈型乙酰膽受體亞型M3(M-AChR M3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒苊醌代仲丁烷 standard for GC,≥99.5% (GC) 5,10,15,20-四(4-吡啶)卟啉 97%
豬26S蛋白體(26S-PSM)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 1,4-二羥蒽醌1-金剛烷羧 98%雙(2,2,6,6,-四-3,5-庚二)銅 99%
豬性別決定區(qū)Y框蛋白9(SOX9)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒1,4-二羥蒽醌2,5-二-2,5-己二 99%過釕四內(nèi) 97%
豬B因子(BF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 1,8-二羥蒽醌2,5-二-3-己炔-2,5-二 99%三(乙)環(huán)戊二烯六氟磷釕 98%
豬增殖相關(guān)蛋白2G4 (PA2G4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒1,8-二羥蒽醌烯 CP(劇品)三環(huán)戊二烯鉑(IV) 99%
豬腫瘤特異性移植抗原(TSTA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 1,8-二羥蒽醌1,2-環(huán)己烷二二縮水甘油酯 90%反式二-(m)-雙[2-(二鄰苯膦)芐]乙二鈀(II) 98%
豬3-硝酪氨(3-NT)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 芐脒鹽鹽戊二(50%) AR,50% in H2O 穿心蓮內(nèi)酯 98%
豬粒集落激因子(CSF3/GCSF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒芐脒鹽鹽異丁乙烯 99.5%黃芪苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%
豬膠質(zhì)系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 芐脒鹽鹽異丁乙烯 99%雷公藤紅素 98%
豬表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒鄰苯二氫嘧啶 98%雷公藤素 98%
澳洲胎牛血清細(xì)胞核糖核3/Drosha抗體頭孢呋辛鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Naringenin
脫氧胸苷激DTYMK抗體頭孢呋辛酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Jatrorrhizine
雙特異性蛋白磷10抗體頭孢克洛(標(biāo)準(zhǔn)品) Quercetin dihydrate
雙特異性蛋白磷5抗體頭孢克肟(標(biāo)準(zhǔn)品) Quercetin
磷化動(dòng)力蛋白1抗體頭孢拉定(標(biāo)準(zhǔn)品) Tolvaptan
動(dòng)力蛋白1抗體頭孢哌(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulfathiazole
磷化動(dòng)力蛋白1抗體頭孢哌S異構(gòu)體(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulfathiazole
腦啡肽A抗體頭孢哌鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Cyclobenzaprine HCl
強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良相關(guān)蛋白9抗體頭孢哌雜質(zhì)A(標(biāo)準(zhǔn)品) Medetomidine HCl