支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶(BCAT)活性測(cè)定試劑盒

支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶(BCAT)活性測(cè)定試劑盒公司正熱銷的產(chǎn)品：促黃體生成素抗體核氧化
抗CEA小鼠雜交瘤細(xì)胞；C2蛋白氧化
13465-93-5鎢銀細(xì)菌氧化應(yīng)激活性氧（ROS）比色法定量檢測(cè)試劑盒（羥自由基）
苦龍膽酯苷CAS:21018-84-8超氧化物歧化（SOD）活性檢測(cè)試劑盒

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

 

測(cè)定步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測(cè)定樣本較少，可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、 樣本測(cè)定

注意事項(xiàng)

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？

對(duì)照管的范圍是0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

3. 樣品測(cè)定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。

注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說明：孵育25至35分鐘檢測(cè)出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測(cè)定。

4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：

a. 抑制百分率的計(jì)算：

參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2)－(A樣品－A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%

如果沒有設(shè)置空白對(duì)照3，則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為：

抑制百分率＝(A空白對(duì)照1－A樣品) / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%

如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。

心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒大豆甾B對(duì)壬酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品，異構(gòu)體混合物乙(95%) CP,95.0%

心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒大果桉 A對(duì)壬酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品,純品乙(95%)  for HPLC

血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨激1(Tie1)試劑盒大果桉 C正 AR,97%乙(95%) GR,95.0%        

血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨激1(Tie1)試劑盒大果桉 E正 CP,95%乙(95%)  ACS

血管生成素2(ANG-2)試劑盒大果桉 H正 Standard for GC，>99%(GC)95%藥用酒精 藥用級(jí)

血管生成素2(ANG-2)試劑盒大果桉 I乙正酯 AR,99.0% 95%乙 光譜純

血管生成素1(ANG-1)試劑盒大果桉 J醋酯 99%高哌 98%

血管生成素1(ANG-1)試劑盒大果桉 K乙二  99.4%2-吡啶 98%

血管生長素(ANG)試劑盒大果桉 L正 CP,98.5% 乙黃原 AR，95%

血管生長素(ANG)試劑盒大果桉 N聚乙烯吡咯烷 平均分子量 8000, K16-18乙黃原 98%

血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒二三乙烯 CP,98.5%2-氨嘧啶 98%

血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒二酚1,2,3,4-四氫萘 CP2-(3-苯氧) 98%

帕金森氏病2Parkin(Park2)試劑盒螺1,2,3,4-四氫萘 AR，97%1-酰哌啶 99%

帕金森氏病2Parkin(Park2)試劑盒色原烯1,2,3,4-四氫萘 Standard for GC, ≥99.5% (GC)3-吡啶 98%

紐蛋白(VCL)試劑盒烯1,2,3,4-四氫萘  >98.5%(GC)反-玉米素 98%

紐蛋白(VCL)試劑盒酰 F1,2,3,4-四氫萘 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.5% (GC)偏釩銨 CP，98%
支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶(BCAT)活性測(cè)定試劑盒EGF應(yīng)答因子1抗體抗體松馳素 E CYTOCHALASIN E(RG)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat

化鋅指蛋白36抗體松馳素 D CYTOCHALASIN D(RG)Human, Mouse

鋅指蛋白347抗體松馳素 C CYTOCHALASIN C(RG)Human, Mouse, Rat

鋅指蛋白BED5抗體松弛素 B CYTOCHALASIN B(RG)(PLEASE CALL)Human, Mouse

鋅指蛋白704抗體松馳素 A CYTOCHALASIN A(RG)Human, Mouse, Rat

抑癌蛋白5/鋅指蛋白434抗體2-環(huán)己烷環(huán)己 CYCLOHEXYLCYCLOHEXANONE, 2-(SG)Human, Mouse, Rat

ZCWCC1抗體2-環(huán)己烷環(huán)己 CYCLOHEXYLCYCLOHEXANONE, 2-(SG)Human, Mouse

鋅指蛋白300抗體環(huán)己 CYCLOHEXANONE(SG)Human, Mouse

鋅指蛋白ZBTB39抗體薊苦素 CYNISIN(CNICIN)(RG)Human, Mouse