甘油激酶（GK）活性試劑盒

甘油激酶（GK）活性試劑盒公司正熱銷的產(chǎn)品：人γ干擾素誘導單核細胞因子(MIGF/CXCL9)ELISA試劑盒NF KAPPA B P65蛋白免疫共沉淀分析試劑盒
SOX9 mRNA原位雜交試劑盒NF KAPPA B P65蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒
GDP甘露糖焦磷化抗體細胞NF KAPPA B P50蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒
1317-37-9硫化亞鐵載玻片細胞NF KAPPA B

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

自備儀器和用品：

酶標儀、離心機、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提?。?/span>

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

 

測定步驟：

1、 酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、 樣本測定

注意事項

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？

對照管的范圍是0.4-1。對照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當減少稀釋倍數(shù)；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應時間不夠，可以延長反應時間（反應時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。

大鼠間粘附分子1(ICAM-1/CD54)試劑盒 肝素鈉溶液(0.5%,62.5KU,無菌)Boc-L-天冬氨1-芐酯  98%三硅烷 99%

大鼠粒巨噬集落激因子(GM-CSF)試劑盒肝素鈉溶液(0.5%,62.5KU,無菌)Boc-L-酪氨 98%乙苯 Standard for GC，≥99.5%(GC)

大鼠粒巨噬集落激因子(GM-CSF)試劑盒肝素鈉溶液(0.1%,12.5KU)BOC-D-纈氨 98%乙苯 99.8%，無水級

大鼠膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)試劑盒肝素鈉溶液(0.5%,62.5KU)BOC-L-羥脯氨酯 98%乙苯 AR,98.5%

大鼠膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)試劑盒枸櫞鈉抗凝劑(3.2%,無菌)BOC-L-苯甘氨 98%乙苯標準溶液1000ppm，質(zhì)：

大鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)試劑盒枸櫞鈉抗凝劑(3.2%)BOC-D-天冬酰 98%乙苯 >99.5%(GC)

大鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)試劑盒枸櫞鈉抗凝劑(4%,無菌)BOC-L-苯甘氨 98%乙苯 分析標準品

大鼠纖連蛋白(FN)試劑盒 枸櫞鈉抗凝劑(4%)苯氧羰酰琥珀酰亞 98%間二苯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)

大鼠纖連蛋白(FN)試劑盒 EDTA.2K抗凝劑(10×)N-叔丁氧羰-N'-氧蒽-L-天門冬酰 98%間二苯 99.0%

大鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)試劑盒化銨溶液(5mol/L)Boc-L-天冬氨4-環(huán)己酯 99%間二苯 CP,95.0%

大鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)試劑盒化銨溶液(50mmol/L)Boc-L-天冬氨4-酯 98%間二苯 AR,98%

大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)試劑盒秋水仙溶液(Colchicine,10mg/ml)Boc-L-賴氨 98%間二苯標準溶液1mg/ml,溶劑:,水質(zhì)分析

大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)試劑盒班氏試劑(Benedict's Reagent)BOC-D-脯氨 98%鄰二苯 Standard for GC,≥99% (GC)

大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)試劑盒斐林試劑(Fehling's solution)BOC-L-酪氨酯 99%鄰二苯 for HPLC,≥96.0% (GC)

大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)試劑盒羅斯試劑(Rous Reagent)O-芐-L-酪氨 98%鄰二苯 CP

大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)試劑盒Molisch試劑BOC-L-羥脯氨 98%鄰二苯 98.0%
甘油激酶（GK）活性試劑盒ZSWIM3蛋白抗體紫花前胡素 DEACYLGYMNEMIC ACID(SH)Human, Mouse

E3泛素蛋白連接ZSWIM2抗體紫花前胡素 DEACYLGYMNEMIC ACID(SH)Human, Mouse, Rat

鋅指/環(huán)指蛋白4抗體DEACETYLBACCATIN-III, 7-(triethylsil)-10-(RG)Human, Mouse

鋅指蛋白828抗體DEACETYLBACCATIN-III, 7-(triethylsil)-10-(RG)Human

胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗體（閉鎖小帶蛋白1）DEACETYLTAXOL C, 10-(RG)Human

凋亡相關蛋白激3抗體DEACETYLTAXOL C, 10-(RG)Human, Mouse, Rat

鋅指蛋白211抗體10-去乙酰三尖杉寧 DEACETYLTAXOL B, 10-(RG)Human, Mouse

鋅指蛋白749抗體10-去乙酰三尖杉寧 DEACETYLTAXOL B, 10-(RG)Human, Mouse

磷化zeta相關蛋白70抗體7-表-10-脫乙酰紫杉 DEACETYLTAXOL, 7-EPI-10-(P)Human

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

3. 樣品測定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設置樣品孔和各種空白對照孔。

注意：加入反應啟動工作液后反應即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。

4. 樣品中總SOD活力的計算：

a. 抑制百分率的計算：

參考如下計算公式計算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%

如果沒有設置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%

如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應體系中抑制百分率為50% 時，反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。