甲基乙二醛（MG）含量測(cè)試定試劑盒

甲基乙二醛（MG）含量測(cè)試定試劑盒公司正熱銷的產(chǎn)品：6080-58-6檸檬鋰電擊法細(xì)胞融合試劑盒
老鸛草素CAS:60976-49-0甲基纖維素細(xì)胞克隆試劑盒
沼澤紅假單胞菌（菌液）（暫無）軟瓊脂細(xì)胞克隆試劑盒
竹節(jié)香附素A、多被銀蓮花素A、紅背銀蓮花素ACAS:89412-79-3藍(lán)色熒光染色體核型分析試劑盒

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提取：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

 

測(cè)定步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測(cè)定樣本較少，可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、 樣本測(cè)定

注意事項(xiàng)

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？

對(duì)照管的范圍是0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

鼻咽癌(NPC)試劑盒橙皮苷1,2,3-三苯 91%3,5-二叔丁溴苯 99%

鼻咽癌(NPC)試劑盒橙皮苷查爾1,2,3-三苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品O-[(乙氧羰)]-N,N,N',N'-四硫尿四氟鹽  98%

膀胱癌抗原(UBC)試劑盒當(dāng)藥寧(+)-δ-酚 90%1-乙-(3-二氨)碳二亞鹽鹽 98.5%

膀胱癌抗原(UBC)試劑盒丁香酚(+)-δ-酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品2-乙氧-1-乙氧碳酰-1,2-二氫喹啉 99%

廣譜角蛋白(P-CK)試劑盒黃連3-巰-1,2- Matrix for FAB-MS and liquid SIMS, ≥98.5%2-氟-1,3-二化咪唑翁六氟磷酯 97%

廣譜角蛋白(P-CK)試劑盒蓮心磷三酯 99%乙脒 99%

癌因蛋白質(zhì)p190/bcr-abl 試劑盒麥冬高黃A托布津 分析標(biāo)準(zhǔn)品四氟代脲六氟磷酯 98%

癌因蛋白質(zhì)p190/bcr-abl 試劑盒麥冬黃烷B碲 98%9-芴-N-琥珀酰亞碳酯 98%

膀胱腫瘤抗原(BTA)試劑盒小檗硫代嗎啉 98%芴氧羰酰 98%

膀胱腫瘤抗原(BTA)試劑盒辛弗林鹽鹽綠草定  分析標(biāo)準(zhǔn)品芴氧羰酰 99%

中期因子(MK)試劑盒異茜草素2-乙酰檸檬三乙酯 99%4-(羥)苯氧乙 98%

中期因子(MK)試劑盒異茜草素－1－三(三硅)硅烷 90%苯并三氮唑-N,N,N',N'-四脲六氟磷酯 99%

BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)試劑盒原薯蕷皂苷溴化 99%1-羥-苯并-三氮唑(無水) 99%

BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)試劑盒正壬 99.99%（劇品）3-羥-1,2,3-苯并三-4(3H)- 98%

B淋巴瘤因子2(Bcl-2)試劑盒氧醉椒素水質(zhì)標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品（劇品）2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四脲六氟磷酯 99%

B淋巴瘤因子2(Bcl-2)試劑盒假荊芥屬苷(+)-γ-維E 96%1-羥-7-偶氮苯并三氮唑 99%
甲基乙二醛（MG）含量測(cè)試定試劑盒APC標(biāo)記的兔抗牛IgM2,3,4-三氧苯（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgM2,3,4-三氧苯（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗牛IgM2,3-丁二(標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))Human, Mouse

Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgM2,3-二氫-6-苯咪唑【2,1-b】噻唑鹽鹽（鹽...Human, Mouse, Rat

Cy5標(biāo)記的兔抗牛IgM2,6-二（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgM2,6-二酚（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

Cy7標(biāo)記的兔抗牛IgM2-（4-異丁酰苯）（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

生物素標(biāo)記的兔抗牛IgM2-氨-4-苯酚（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

膠體金標(biāo)記的兔抗牛IgM2-苯乙酰（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

3. 樣品測(cè)定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。

注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說明：孵育25至35分鐘檢測(cè)出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測(cè)定。

4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：

a. 抑制百分率的計(jì)算：

參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2)－(A樣品－A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%

如果沒有設(shè)置空白對(duì)照3，則可以把計(jì)算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對(duì)照1－A樣品) / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%

如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。