土貝母PCR鑒定試劑盒說明書

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環(huán)擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。

儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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特點優(yōu)勢：
    1.   特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
    2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
    3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
   5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
   6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
α-香附酮(標準品)英文名稱： 5,7,4’-Trihydroxy-8-methylflavanone產品別名: 3,6-二氯噠-4-

α－常春藤皂苷（標準品）英文名稱： Aloin B產品別名: 4-溴-1H-吡咯-2-羧酸

β,β-二甲基烯酰阿卡寧（標準品）英文名稱： Arctigenin 4'-O-β-gentiobioside產品別名: [3-(二甲基氨基)基]三苯基磷溴化物氫鹽

β-桉葉(標準品)英文名稱： Matairesinol 4'-O-β-gentiobioside產品別名: 3-氨基-2-甲氧基吡啶-5-酸頻哪酯

β-谷甾英文名稱： Litmus產品別名: 2-(2-吡啶基)異硫脲-N-氧化物鹽酸鹽

β-胡蘿卜素（標準品）英文名稱： 7-O-Methylaloeresin A產品別名: 烯異噻唑

β-欖香酮酸;β-嵐香酮酸(標準品)英文名稱： Cistanoside A產品別名: 5(6)-氨基熒光素

β-萘黃酮(標準品)英文名稱： Aloeresin D產品別名: 氯羰基亞磺酰氯

β-石竹烯(標準品)英文名稱： Picfeltarraenin IV產品別名: 1,2,4,5-環(huán)己烷四甲酸二酐

β-香樹素(標準品)英文名稱： Polygalasaponin XXXI產品別名: 5-乙基-4-羥基-2-甲基-3(2H)-呋喃酮

β-乙酰氧基異戊酰阿卡寧英文名稱： Bismarck Brown R產品別名: L-環(huán)己基氨酸

γ-氨基丁酸(GABA),標準品英文名稱： Bismarck Brown Y產品別名: 咪唑并[1,2-a]嘧啶

凝血因子7抗體 Sinensetin 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

FEM1B抗體 Chelidonine 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

纖維母生長因子3抗體 Cucurbitacin D 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

纖維母生長因子4抗體 Anemoside A3 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

FRA-1蛋白抗體 Scabioside C 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

精神發(fā)育遲滯相關蛋白抗體 V 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

延伸突觸蛋白3抗體 Hederacolchiside A1 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

原纖維蛋白2抗體 Kalopanaxsaponin H 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

尤文肉瘤FLI1蛋白抗體 Lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-[β-D-glucopyranosyl(1→4)[a-L-rhamnopyranosyl) (1→2)-a -L-arabinopyranosyl]oxy], (3β,4a)-) 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
土貝母PCR鑒定試劑盒說明書黃曲霉Anti-CHRM1 Antibody拉丁屬名: Aspergillus  flavus

糙皮側耳Anti-CHRM1 Antibody拉丁屬名: Pleurotus ostreatus

克魯維畢赤酵母Anti-CHRM2 Antibody拉丁屬名: Pichia kluyveri

紅色野野村氏菌Anti-CHRM2 Antibody拉丁屬名: Nonomuraea rubra

單胞菌Anti-CHRM2 Antibody拉丁屬名: Polaromonas  sp.

猴頭菇Anti-CHRNA1 Antibody僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

谷氨酸棒桿菌Anti-CHRNA3 Antibody拉丁屬名: Corynebacterium  glutamicum

解糖假蒼白桿菌Anti-CHRNA1 Antibody拉丁屬名: Pseudochrobactrum saccharolyticum

翅Acetobacter senegalensisAnti-CHRM3 Antibody拉丁屬名: Acetobacter senegalensis
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。