公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
多胺氧化酶(PAO)試劑盒 | 48樣 96樣 | BJ-01S63244 |
自備儀器和用品:
酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水
粗酶液提取:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
注意事項(xiàng)
1、試劑三為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑三活性低,可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù);(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
c. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
3. 樣品測(cè)定:
a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分,注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。
注意:加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始,可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明:孵育25至35分鐘檢測(cè)出來的SOD活力無顯著差異,但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性,推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無450nm 濾光片,可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算:
a. 抑制百分率的計(jì)算:
參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率:
抑制百分率=[(A空白對(duì)照1-A空白對(duì)照2)-(A樣品-A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1-A空白對(duì)照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對(duì)照3,則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為:
抑制百分率=(A空白對(duì)照1-A樣品) / (A空白對(duì)照1-A空白對(duì)照2) × 100%
如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ,則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高,則需適當(dāng)稀釋樣品;如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低,則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。
b. SOD酶活力單位的定義:在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí),反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意:SOD的活力單位的定義方式有很多種,不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定
肺癌標(biāo)志物DR-70(DR-70TM)試劑盒胡薄荷羅丹明B 高純級(jí),≥95.0%(HPLC)硫脲 ACS, ≥99.0%
肺癌標(biāo)志物DR-70(DR-70TM)試劑盒胡黃連苷I樹脂天青 90%(R)-(+)-2,2'-雙(二苯膦)-1,1'-聯(lián)萘 98%
胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)試劑盒 胡黃連苷II羅丹明6G AR(S)-(-)-2,2'-雙(二苯膦)-1,1'-聯(lián)萘 98%
胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)試劑盒 胡黃連苷III樹脂天青 for cell culture,≥90% (HPLC)(±)-2,2'-雙-(二苯膦)-1,1'-聯(lián)萘 98%
本周蛋白(BJP) 試劑盒胡椒芘 99%二苯次膦酰 98%
本周蛋白(BJP) 試劑盒胡蘿卜苷迷迭香 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97%對(duì)苯 AR,99.0%
癌胚鐵蛋白(CEF) 試劑盒胡麻屬苷蓖麻油 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%蘆薈大黃素 分析標(biāo)準(zhǔn)品
癌胚鐵蛋白(CEF) 試劑盒胡桃醌D-核糖-5-磷二鈉鹽 95%蘆薈大黃素 95%
鱗狀癌相關(guān)抗原(SCCAg)試劑盒湖貝素(R)-1-氨-8-(二苯膦)-1,2,3,4 -四氫 97%雷公藤紅素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%
鱗狀癌相關(guān)抗原(SCCAg)試劑盒葫蘆巴海藻鈉 生化級(jí),用于固定、等梓 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97% (HPLC)
腫瘤特異性抗原(TSA) 試劑盒 葫蘆巴鹽鹽天狼星玫紅,BB AR梓 ≥97% (HPLC)
腫瘤特異性抗原(TSA) 試劑盒 葫蘆素B亞磷鈉,五水 AR1-脫氧野尻霉素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥95%
黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)試劑盒葫蘆素D7B 95%脫水穿心蓮內(nèi)酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%
黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)試劑盒葫蘆素E二硅油DC-200 GC,粘度~350 mPa.s, neat(25 °C)洋薊素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,95%
癌易感蛋白2(BRCA-2)試劑盒槲皮苷 二硅油DC-200 粘度~30000 mPa.s, neat(25 °C)吳茱萸內(nèi)酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%(HPLC)
癌易感蛋白2(BRCA-2)試劑盒槲皮素D-山梨 超純級(jí),≥99.5% (HPLC)吳茱萸內(nèi)酯 97.5%(HPLC)
多胺氧化酶(PAO)試劑盒Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗小鼠IgG1,3-丁二 1,3-Butanediol >99.0%(GC)Human
Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗兔IgM1,3-丁二 1,3-Butanediol >99.0%(GC)Human, Mouse
Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗猴IgG1,4-丁二磺二鈉鹽 Disodium 1,4-Butanedisulfonate >98.0%(T)Human
PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgM硫鹽七水合物[用于硝鹽分析] Brucine Sulfate Heptahydrate[for Nitrate Analysis]>98.0%(LC&T)Human, Mouse
PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗兔IgM2-溴間二苯 2-Bromo-m-xylene >98.0%(GC)Human, Mouse, Rat
Cy5標(biāo)記的兔抗大鼠IgG2-溴間二苯 2-Bromo-m-xylene >98.0%(GC)Human, Mouse, Rat
Cy5.5標(biāo)記的兔抗大鼠IgG2-溴異戊 2-Bromo-3-methylbutyric Acid >90.0%(GC)Human, Mouse, Rat
PE標(biāo)記的兔抗大鼠IgG2-溴戊 2-Bromovaleric Acid >98.0%(GC&T)Human, Mouse, Rat
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgG2-溴戊 2-Bromovaleric Acid >98.0%(GC&T)Human