絡(luò)石藤PCR鑒定試劑盒說明書

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。

儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
    1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
    2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
    3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過程。
    4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
   5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
   6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
蛋白C(PROC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human EPS15 (Epidermal growth factor receptor substrate 15) ELISA KIT包裝5g

蛋白C(PROC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human EPHB4 (Ephrin type-B receptor 4) ELISA KIT包裝1g

Ⅳ型膠原α1(COL4α1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human TUFM (Elongation factor Tu, mitochondrial) ELISA KIT包裝5g

外皮蛋白(EVPL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human EEF2 (Elongation factor 2) ELISA KIT包裝10g

通用轉(zhuǎn)錄因子ⅡH肽1(GTF2H1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human EPS8L1 (Epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 1) ELISA KIT包裝50g

單核趨化蛋白4(MCP4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human ELSPBP1 (Epididymal sperm-binding protein 1) ELISA KIT包裝25g

單核趨化蛋白4(MCP4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human ERN2 (Serine/threonine-protein kinase/endoribonuclease IRE2) ELISA KIT包裝5g

尿激酶型纖溶酶原激活因子受體(uPAR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human EPS8L3 (Epidermal growth factor receptor kinase substrate 8-like protein 3) ELISA KIT包裝1g

尿激酶型纖溶酶原激活因子受體(uPAR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human EPC1 (Enhancer of polycomb homolog 1) ELISA KIT包裝25g

血小板生成素(TPO)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human ERAS (GTPase ERas) ELISA KIT包裝5g

血小板生成素(TPO)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human ECHDC1 (Ethylmalonyl-CoA decarboxylase) ELISA KIT包裝1g

血小板生成素(TPO)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Human ERRFI1(ERBB receptor feedback inhibitor 1) ELISA Kit包裝5g
絡(luò)石藤PCR鑒定試劑盒說明書米曲霉Human THRA(Thyroid hormone receptor alpha) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus  oryzae

Bacillus tequilensisHuman FH(FumaRate hydRatase, mitochondrial) ELISA Kit僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

科氏葡萄球菌科氏亞種Human GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) ELISA Kit拉丁屬名: Staphylococcus  cohnii subsp. cohnii

水生哈薩克斯坦酵母Human MASP1(Mannan-binding lectin serine protease 1) ELISA Kit拉丁屬名: Kazachstania aquatica

美味牛肝菌Human LSS(Lanosterol synthase) ELISA Kit僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

大腸埃希氏菌Human IDE(Insulin-degrading enzyme) ELISA Kit拉丁屬名: Escherichia coli

爪哇根霉Human IFI16(Gamma-interferon-inducible protein 16) ELISA Kit拉丁屬名: Rhizopus  javanicus

鏈格孢Human KLK7(Kallikrein-7) ELISA Kit拉丁屬名: Alternaria alternata

枯草芽胞桿菌Human FPR2(N-formyl peptide receptor 2) ELISA Kit拉丁屬名: Bacillus  subtilis
PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。