一步式RT-PCR Mix

一步式RT-PCR Mix注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

產(chǎn)品特點：

    全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶，可在PCR反應的過程中抑制非特異擴增，從而最大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生，提高熒光定量PCR反應的特異性；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統(tǒng)熒光染料相比，對PCR反應抑制更小，而且熒光信號更強，檢測靈敏度更高；
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系，進而有效防止實驗過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實驗所需組分，并配備2×Buffer，可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應，方便用戶使用；
    試劑盒的通用性強，可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。

產(chǎn)品名稱	一步式RT-PCR Mix
英文名稱	詳見說明書
編號	BJP3176

通用原則：
1，先選擇好探針，然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。
2， 擴增子的長度應不超過400bp，理想的能在100－150bp內(nèi)，擴增片斷約短，有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之間，GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應，從而會導致擴增效率的降低，及在SG分析中非特異信號。
4， 為了保證效率和重復性，應避免重復的核苷酸序列，尤其是G（不能有4個連續(xù)的G）
5， 將引物和探針互相進行配對檢測，以避免二聚體和發(fā)卡結構的形成。
b），探針設計指導
1，在設計引物之前設計探針
2，探針的Tm值應在68－70℃之間，如果是目測探針，則要仔細審查GC富含區(qū)。
3，探針的5’端要避免有鳥氨酸，5’G會有淬滅作用，即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4，選擇C多于G的鏈作探針，G的含量多于C會降低反應效率，這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。
6， 探針應盡可能的短，不要超過30個bp。
7， 檢測探針的DNA折疊和二級結構。
一步式RT-PCR Mix服務流程:
1.客戶認真寫好訂單，提供待檢基因相關信息；
2.簽訂技術服務合同，支付預付款（30-50%)；
3.設計合成定量PCR引物（或客戶提供文獻引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉錄；
5.PCR預實驗，主要檢測引物的特異性和擴增效率；
6.正式定量實驗：對所有樣品上機檢測；
7.實驗結果和數(shù)據(jù)分析，形成報告。
以下是公司*產(chǎn)品：

共聚維酮標準品β-Cydodextrin β-環(huán)糊精 SIGMA

玉米油標準品Sodium Chloride 氯化鈉（AR 99.5%）

促腎上腺皮質激素標準品Sodium Chloride 氯化鈉（AR 99.5%）

醋酸可的松標準品Sodium Chloride 氯化鈉（AR 99.5%）

棉籽油標準品Sodium Chloride 氯化鈉（GR 99.8%）

肌酸酐標準品Sodium Chloride 氯化鈉（GR 99.8%）

色甘酸鈉標準品Sodium Chloride 氯化鈉 進口（GR 99.8%）

色甘酸鈉相關物質A標準品Sodium Chloride 氯化鈉 進口（GR 99.8%）

交聯(lián)聚維酮對照品標準品   AR  500g

克羅米通標準品   GR  500g 苯硫咪唑相關物質B標準品PVP K-30 聚烯吡咯烷酮，進口分裝 Fluka

非諾貝特標準品PVP K-30 聚烯吡咯烷酮，進口分裝 Fluka

磺酸非諾多泮標準品羧基纖維素鈉  （粘度300-800）

非諾多泮相關物質A標準品羧基纖維素鈉  （粘度800-1200）

非諾多泮相關物質B標準品Microcrystalline cellulose 微晶纖維素  纖維素；纖維素粉；微晶質；微晶體；亞硫酸鹽紙漿；木質粉

非諾洛芬鈣標準品Dextrin from Maize starch  糊精  玉米糊精

非諾洛芬鈉標準品Dextran 右旋糖酐5000

非諾貝特相關物質A標準品Dextran 右旋糖酐1萬

非諾貝特相關物質B標準品Hyaluronic acid 透明質酸

非諾貝特相關物質C標準品Methyl Cellulose 基纖維素

原理:
所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。