詳細介紹
通用原則:
1, 先選擇好探針,然后設(shè)計引物使其盡可能的靠近于探針。
2, 擴增子的長度應(yīng)不超過400bp,理想的能在100-150bp內(nèi),擴增片斷約短,有效的擴增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),從而會導(dǎo)致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。
4, 為了保證效率和重復(fù)性,應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進行配對檢測,以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b),探針設(shè)計指導(dǎo)
1,在設(shè)計引物之前設(shè)計探針
2,探針的Tm值應(yīng)在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區(qū)。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應(yīng)效率,這時就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針。
6, 探針應(yīng)盡可能的短,不要超過30個bp。
7, 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Abalone Spherical Virus |
編號 | BJP2016 |
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原理:
產(chǎn)品僅用于科研所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
產(chǎn)品特點:
全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴增,從而最大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,與傳統(tǒng)熒光染料相比,對PCR反應(yīng)抑制更小,而且熒光信號更強,檢測靈敏度更高;產(chǎn)品僅用于科研
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,進而有效防止實驗過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實驗所需組分,并配備2×Buffer,可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應(yīng),方便用戶使用;
試劑盒的通用性強,可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。
服務(wù)流程:
1.客戶認真寫好訂單,提供待檢基因相關(guān)信息;
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同,支付預(yù)付款(30-50%);
3.設(shè)計合成定量PCR引物(或客戶提供文獻引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄;
5.PCR預(yù)實驗,主要檢測引物的特異性和擴增效率;
6.正式定量實驗:對所有樣品上機檢測;
7.實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)分析,形成報告。產(chǎn)品僅用于科研
以下是公司*產(chǎn)品:
網(wǎng)狀纖維染色液(改良Gomori氨銀法)Rat Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase,G6PD ELISA Kit
Gordon-Sweets銀氨溶液Rat HYD ELISA Kit
網(wǎng)狀纖維染色液(改良Gordon-Sweets法)Rat ovalbumin specific IgE,OVA sIgE ELISA Kit
苯胺藍染色液Rat C-type natriuretic peptide,CNP ELISA Kit
Masson三色染色液Rat Stromal cell derived factor 1a,SDF-1a ELISA Kit
Masson三色染色液Rat prealbumin,PA/PLB ELISA Kit
改良Masson三色染色液Rat prostacycline,PGI ELISA Kit
Pollak三色染色液Rat lymphocyte factor ELISA Kit
Pollak三色染色液Rat ovalbumin specific IgG,OVA sIgG ELISA Kit
天狼星紅染色液-A液Rat activated protein C,APC ELISA Kit
鮑球狀病毒探針法熒光定量PCR試劑盒人白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒三聚氰胺快速檢測試劑盒(檢乳制品,0.5ppb,一步法)
人白血病抑制因子受體(LIFR)磺胺類(Sas)快速檢測試紙條(檢蜂蜜,檢測限1-10ppb,比色法)
人表皮生長因子(EGF)磺胺類(Sas)快速檢測試紙條(檢蜂蜜,檢測限5-30ppb,比色法)
人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒磺胺類(Sas)快速檢測卡(檢乳制品,檢測限10-60ppb,消線法)
人端粒酶(telomerase)磺胺類(Sas)快速檢測條(檢乳制品,檢測限2-20ppb,比色法)
人肌鈣蛋白-T(Tn-T)林可快速檢測試紙條(檢乳制品,檢測限30ppb,消線法)
人基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)慶大快速檢測試紙條(檢乳制品,檢測限50ppb,消線法)
人基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)鏈(Strep)快速檢測試紙條(檢蜂蜜)
人基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9) ELISA試劑盒鏈(Strep)快速檢測試紙條(檢乳制品,檢測限50ppb,比色法)
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)四環(huán)素快速檢測試紙條(檢蜂蜜,檢測限 30ppb,消線法)