詳細(xì)介紹
實(shí)時(shí)熒光定量PCR:
腺病毒E型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:產(chǎn)品僅用于科研
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線(xiàn)性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴(lài)的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到全世界的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
定量PCR除可以對(duì)樣品的初始濃度進(jìn)行準(zhǔn)確定量外,還有其它多種豐富的應(yīng)用。還包括基因表達(dá)調(diào)控情況的分析、等位基因的分析等。產(chǎn)品僅用于科研
產(chǎn)品名稱(chēng) | 腺病毒E型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 |
英文名稱(chēng) | Adenovirus(AV) |
編號(hào) | BJP2042 |
熒光化學(xué)物質(zhì):
實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡(jiǎn)述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái)。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過(guò)溶解曲線(xiàn),確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì),導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過(guò)程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì),熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖
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以下產(chǎn)品是公司正在*產(chǎn)品:
蘇丹IV酒精飽和溶液Rat Lipopolysaccharides/lipooligosaccharide,LPS/LOS ELISA Kit
蘇丹Ⅳ染色液-A液Rat indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO ELISA Kit
蘇丹Ⅲ染色液Rat thymus activation regulated chemokine,TARC ELISA Kit
油紅O染色液(細(xì)胞)Rat Phospholipase C,PLC ELISA Kit
油紅O染色液(細(xì)胞)Rat glucocorticoid receptor,GR ELISA Kit
油紅O異醇飽和液Rat Aspartate aminotransferase,GOT/GPT ELISA Kit
改良油紅O染色液Rat Pulmonary surfatcant-associated protein C,SP-C ELISA Kit
改良油紅O染色液Rat Cytosolic Phospholipase A2,cPLA2 ELISA Kit
糊精水溶液(1%)Rat dopamine transporter,DAT ELISA Kit
蘇丹黑B染色液Rat Angiotensin Ⅰ Converting Enzyme,ACEⅠ ELISA Kit
腺病毒E型探針?lè)晒舛縋CR試劑盒人熱休克蛋白70(HSP70)ELISA試劑盒過(guò)氧化物酶的快速檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
人熱休克蛋白40(HSP40)ELISA試劑盒面粉中溴酸鉀檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
人熱休克蛋白20(HSP20)ELISA試劑盒面粉中曲酸檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
人細(xì)胞周期素D3(Cyclin D3)面粉中硼砂(硼酸)檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
人細(xì)胞周期素D2(Cyclin D2)面粉中鋁(硫酸鋁鉀)含量快速檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
人細(xì)胞周期素D1(Cyclin D1)面粉中硫脲檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
人凝溶膠蛋白(Gelsolin)ELISA試劑盒面粉中間苯二酚檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
游離前列腺特異性抗原(FREE PSA)面粉中過(guò)硫酸鈉(鉀)檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
人前列腺特異性抗原(PSA)過(guò)氧化苯酰速測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
癌胚抗原(CEA)真假紅葡萄酒速測(cè)試劑盒
熒光定量PCR服務(wù):
簡(jiǎn)介:產(chǎn)品僅用于科研實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗(yàn)證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求:
(01)請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。
(03)請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來(lái)源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設(shè)計(jì)與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
(03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
(04)實(shí)驗(yàn)完成后,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn):
我公司根據(jù)客戶(hù)的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。