詳細(xì)介紹
通用原則:
1, 糞產(chǎn)堿桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒先選擇好探針,然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針。
2, 擴(kuò)增子的長度應(yīng)不超過400bp,理想的能在100-150bp內(nèi),擴(kuò)增片斷約短,有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),從而會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低,及在SG分析中非特異信號(hào)。
4, 為了保證效率和重復(fù)性,應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個(gè)連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進(jìn)行配對檢測,以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b),探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)
1,在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針
2,探針的Tm值應(yīng)在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會(huì)有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會(huì)存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會(huì)降低反應(yīng)效率,這時(shí)就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針。
6, 探針應(yīng)盡可能的短,不要超過30個(gè)bp。
7, 檢測探針的DNA折疊和二級(jí)結(jié)構(gòu)。
產(chǎn)品名稱 | 糞產(chǎn)堿桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Alcaligenes faecalis |
編號(hào) | BJP2056 |
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原理:
產(chǎn)品僅用于科研所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
產(chǎn)品特點(diǎn):
全新的熱啟動(dòng)DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴(kuò)增,從而最大限度地減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生,提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,與傳統(tǒng)熒光染料相比,對PCR反應(yīng)抑制更小,而且熒光信號(hào)更強(qiáng),檢測靈敏度更高;產(chǎn)品僅用于科研
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系,進(jìn)而有效防止實(shí)驗(yàn)過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實(shí)驗(yàn)所需組分,并配備2×Buffer,可完成不同類型熒光探針的實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng),方便用戶使用;
試劑盒的通用性強(qiáng),可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和。
服務(wù)流程:
1.客戶認(rèn)真寫好訂單,提供待檢基因相關(guān)信息;
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同,支付預(yù)付款(30-50%);
3.設(shè)計(jì)合成定量PCR引物(或客戶提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄;
5.PCR預(yù)實(shí)驗(yàn),主要檢測引物的特異性和擴(kuò)增效率;
6.正式定量實(shí)驗(yàn):對所有樣品上機(jī)檢測;
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析,形成報(bào)告。產(chǎn)品僅用于科研
以下是公司*產(chǎn)品:
DAPI染色封片劑3,5-二基異噁唑
酸性醇分化液(0.5%)3,5-二基異噁唑
酸性醇分化液(1%)順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸酯
亞硫酸氫鈉溶液(1%)油酸酰胺
亞硫酸氫鈉溶液(5%)油酸酰胺
皂化液第2代 Hoveyda-Grubbs 催化劑
黑色素清除液第2代 Hoveyda-Grubbs 催化劑
福爾馬林色素清除液D4476
瘧色素清除液N,N'-二叔氧羰基-L-賴氨酸 N-二酰亞胺酯
氨水溶液(0.1%)N,N'-二叔氧羰基-L-賴氨酸 N-二酰亞胺酯
人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA試劑盒二氫吡啶類(降血壓)快速篩查試劑盒
腦鈉肽噻唑烷酮類(降糖)快速篩查試劑盒
人心鈉肽Pro-ANP(1-98)(減肥藥)快速篩查試劑盒
人大內(nèi)皮素(BigET)酚酞(減肥藥)快速篩查試劑盒
人低密度脂蛋白(OLAB)拉非類(藥)快速篩查試劑盒
人肌紅蛋白(MYO)ELISA Kit那非類(偉)快速篩查試劑盒
人激動(dòng)異構(gòu)酶MB(CKMB)口蹄疫病毒通用型核酸熒光PCR檢測試劑盒
人心肌肌鈣蛋白I(cTNI)ELISA Kit高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸熒光PCR檢測試劑盒
小鼠凝血因子II(FII)豬瘟病毒核酸熒光PCR檢測試劑盒
人凝血因子II(FII)ELISA Kit豬圓環(huán)病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試劑盒