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單細(xì)胞分選要考慮的問題及優(yōu)勢介紹

時間:2022/10/18閱讀:330
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  單細(xì)胞分選通過細(xì)胞識別、細(xì)胞挑取和細(xì)胞轉(zhuǎn)移、跟蹤實時分析四個步驟可以實現(xiàn)對懸浮體系中任何單一類型細(xì)胞或稀有細(xì)胞(如循環(huán)腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞以及血液、骨髓中相關(guān)細(xì)胞等)的抓取分離、分析,細(xì)胞可以轉(zhuǎn)移到PCR管等后續(xù)實驗裝置。
  利用流式細(xì)胞分選技術(shù)進(jìn)行的單細(xì)胞分選,具有精度高、通量大、分選參數(shù)多,成本相對低等優(yōu)點,通過流式分選出足夠多的符合要求的單細(xì)胞進(jìn)行下游實驗并沒有那么容易。
  一、下面三方面是要考慮的問題:
  1、活性
  細(xì)胞活性狀態(tài)對后續(xù)實驗而言很重要,就拿轉(zhuǎn)錄組分析為例,無論是RNA-Seq還是高通量表達(dá)譜芯片技術(shù),都需要高質(zhì)量的RNA樣本,細(xì)胞活性不好或死細(xì)胞會直接導(dǎo)致RNA降解,實驗無法繼續(xù)。
  2、精度
  流式分選是精密度高的儀器,稍稍不同的參數(shù)(激光、液流等)的設(shè)置都會直接造成結(jié)果偏差;另外既然是想研究單細(xì)胞,那么就得確保分選得到的確為單個細(xì)胞,否則同樣沒有意義。
  3、效率
  自動化替代人工無疑是提高效率、節(jié)省成本的舉措;當(dāng)你需要分選超低含量的細(xì)胞時,務(wù)必是個長時間工程,鞘液用光時,其更換繁瑣度、耗時、連續(xù)性等都是需要考慮的。
  二、單細(xì)胞分選優(yōu)勢:
  1、可直接從培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞分選。
  2、分離粘結(jié)活細(xì)胞的細(xì)胞亞群,分離熒光或者冷光標(biāo)記。
  3、無標(biāo)記的和熒光的細(xì)胞都可通過軟件進(jìn)行自動識別。
  4、可確保細(xì)胞分離后活力,并且可培養(yǎng)。
  5、分選熒光分子探針標(biāo)記的特定細(xì)胞。
  6、單細(xì)胞收集進(jìn)行進(jìn)一步培養(yǎng)、克隆,RNA或者蛋白質(zhì)制備。
  7、免疫制備,進(jìn)行目標(biāo)細(xì)胞分類。
  8、可對各種粘結(jié)細(xì)胞進(jìn)行分類。
  9、細(xì)胞篩選前的細(xì)胞培養(yǎng)。
  10、一般的分選過程只需幾分鐘就可完成。
  11、使用安裝在顯微鏡上的熒光濾片可實現(xiàn)多通道監(jiān)測。

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