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支原體污染是細胞培養(yǎng)試驗室中常見污染之一,保守估計常規(guī)細胞培養(yǎng)中有15–35%存在支原體污染。
什么是支原體?
支原體(mycoplasma)是一類沒有細胞壁、高度多形性、能通過濾菌器、可用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)增殖的小原核細胞型微生物,大小為0.1-0.3微米。
典型的支原體污染來源:
支原體污染可能來自培養(yǎng)基、血清或?qū)嶒灢僮髡撸瑫绊懠毎L率、細胞形態(tài)、基因表達、細胞代謝和細胞活力。支原體感染不易察覺,因此對培養(yǎng)細胞定期進行支原體檢測就非常重要。
– 未檢測細胞之間交叉污染
– 移液時產(chǎn)生的氣霧
– 不同的細胞使用同一瓶的培養(yǎng)基
– 已污染的物質(zhì)
– 已污染的捐獻組織(<1%)
– 來自實驗者的直接污染

細胞支體污染的后果?
支原體生長緩慢,不會馬上使細胞致死, 但會影響細胞內(nèi)的各種參數(shù)。

由于支原體污染會嚴(yán)重影響實驗結(jié)果的可靠性、重復(fù)性以及一致性。這是基礎(chǔ)研究中一個主要問題,同時也是生物產(chǎn)品制造中的一個主要問題。所以對支原體的常規(guī)檢測是一個 非常重要的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。
現(xiàn)行檢測方法

Lonza MycoAlert支原體檢測試劑盒:
20分鐘 之內(nèi)檢測支原體污染


來自lonza的MycoAlert支原體檢測試劑盒是檢測支原體酶活性的生化檢測方法。
支原體酶廣泛存在180多種支原體以及主要六大支原 體污染細胞培養(yǎng)物中,但是在真核細胞中卻沒有。因此檢測支原體酶的有無成為快速、靈敏的篩查支原體污染的標(biāo)準(zhǔn)。

搭配的Lonza Lucetta™2支原體檢測儀可以用于檢測生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光。

它采用特定模式進行設(shè)計,可用于Lonza的MycoAlert™支原體檢測測定,也可用于許多其他基于發(fā)光的測定,例如細胞增殖和細胞毒性測定或熒光素酶報道基因測定。
優(yōu) 點:
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Fast-20分鐘內(nèi)即可診斷出你的培養(yǎng)是否健康無污染,而其它方法一般要幾個小時到數(shù)周的時間。
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Convenient-只需把你的培養(yǎng)物與兩種試劑混合配成100ul,在Lucetta™2支原體檢測儀上讀2次數(shù)。
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Universal-可以檢測所有支原體和無膽甾原體在常規(guī)細胞培養(yǎng)過程中的污染。
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Sensitive-可檢測<50 cfu/ml的支原體,避免出現(xiàn)像PCR和熒光染色方法出現(xiàn)的陰性結(jié)果。
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Complete-該支原體檢測試劑盒包含實驗所需的所有試劑,而不像商業(yè)PCR檢測方法中需要你提供PCR酶、核酸、限制性內(nèi)切酶和瓊脂糖電泳所需的其它試劑。