概述】

地xi泮(diazepam)、安mian酮(methaqualone)在臨床上作為鎮(zhèn)靜cui眠藥，屬于精神管制藥,長期服用有成癮性和依賴性。

近年來,隨著畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,有不法分子在經(jīng)濟利益的驅(qū)動下,擅自在畜禽飼養(yǎng)中添加使用以期增加產(chǎn)肉量。地xi泮、安mian酮在飼料中的濫用,將終導(dǎo)致畜產(chǎn)品中藥物的殘留,從而嚴重影響消費者的身體健康[1]。

地xi 泮、安mian酮的測定方法多集中在臨床制藥和刑偵檢測方面,如血液、尿液、胃內(nèi)容物等。主要有紫外分光光度法檢測;液液提取,用HPLC分析;固相萃取,GC-FID或GC-MS測定;用薄層層析分離定性,用薄層掃描測定含量[1～3]。

【實驗/設(shè)備條件】

色譜柱：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25μm）；

柱溫：150℃（1 min），10℃/min到290℃（4 min）；

進樣模式：不分流進樣；進樣量：1 µL，分流時間1 min；

進樣口溫度：290℃（15 min）；

載氣：氦氣（99.999%），恒流模式，1 mL/min；

質(zhì)譜離子源溫度：310℃，傳輸線溫度：290℃；

掃描模式：選擇離子監(jiān)測模式，每個離子駐留時間0.09 s，

地xi 泮：283,256*,241,221；安mian酮：250, 235*, 217,91；

【樣品提取】

提取

取適量新鮮的豬肉樣品，用勻漿機絞碎，并使均質(zhì)。取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試材料，空白樣品作為空白試料；均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為加標(biāo)回收材料。

稱取試料約1.0 g(到0.01 g)，于15 ml離心管中，加入10 ml乙腈，渦旋后水浴超聲5 min，8000 r/min離心10 min，取上清液于50 ml離心管中，加入30 ml正己烷，渦旋混勻后靜置，棄上層液。取下層液，于50℃氮氣吹至1 ml，加水4 ml，混勻備用。

凈化

C18柱依次用甲醇5 mL和水5 mL活化，取備用液過柱，用50%甲醇水溶液5 mL淋洗，用70%甲醇水溶液5 mL洗脫，收集洗脫液，于50℃氮氣吹干，用200μl甲醇復(fù)溶，待測。

【實驗/操作方法】

本方法是將樣品中的地xi泮和安mian酮用乙腈提取，固相萃取的方法凈化后用氣相色譜-質(zhì)譜進行定性、定量。該方法定量準(zhǔn)確，靈敏度高，重現(xiàn)性好，能夠滿足目前動物性食品中地xi泮和安mian酮檢測的需要。

【實驗結(jié)果/結(jié)論】

儀器分析方法優(yōu)化：以全掃描的方式對目標(biāo)物標(biāo)液進行測定，得到其質(zhì)譜圖，根據(jù)全掃描質(zhì)譜圖經(jīng)NIST譜庫檢索進一步確證目標(biāo)化合物，得到其保留時間，選擇合適的定性和定量的特征目標(biāo)監(jiān)測離子。測定時，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物和待測物的定量離子圖中的峰面積，外標(biāo)法定量。確證時，可根據(jù)碎片離子及其豐度比作為其陽性判別的依據(jù)。在選定的色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖見圖1。

圖 1.由上至下分別為甲醇空白、10 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液及基質(zhì)空白的提取離子圖

 

線性關(guān)系及測定低限：將0.5、1、5、10、50、100、500和1000 ng/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液由低濃度到高濃度進樣。

以測定峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2，表1.。分別將樣品前處理項下的加標(biāo)回收樣品，按照樣品前處理步驟處理，所得的溶液進樣即得各組分的加標(biāo)回收率，具體見表2、表3.。本實驗方法檢出限以3倍信噪比計算得到，本方法測定豬肉中安mian酮和地xi泮的的測定低限為1.0 µg/kg。

圖2.安mian酮（左）和地xi泮（右）的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1.標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果

表2.安mian酮的加標(biāo)回收率（n=5）

表3.地xi泮的加標(biāo)回收率（n=5，本底檢出38.55ng/ml）

圖3.由上至下分別為低、中、高濃度的加標(biāo)回收率譜圖

回收率及精密度實驗：用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為加標(biāo)回收材料。按上述方法進行提取、凈化和測定，豬肉樣品中各目標(biāo)物的添加濃度均為 10 ng/ml、50 ng/ml和100 ng/ml 三個水平，每個濃度點平行 5 份，各添加譜圖見圖3，低濃度（10 ng/ml）各組分選擇離子質(zhì)譜圖和標(biāo)樣質(zhì)譜圖見圖4，5.。由圖4和圖5的對比可以看出盡管在低濃度地xi泮周圍雜峰較多，但是其離子比例仍然與標(biāo)樣接近，符合定性要求?；厥章示唧w結(jié)果見表2、3.。

圖4. SIM模式下標(biāo)準(zhǔn)溶液10 ng/ml的質(zhì)譜圖

圖5. SIM模式下加標(biāo)回收率溶液10 ng/ml的質(zhì)譜圖

 

結(jié)論

本實驗參考食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB29697-2013,采用氣質(zhì)聯(lián)用檢測豬肉組織中的地xi泮和安mian酮，方法靈敏，結(jié)果可靠，可以為動物食品中的地xi泮和安mian酮的檢測提供參考。

【儀器/耗材清單】

儀器

Trace1310-ISQ氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，配EI源（ThermoScientific）；

AS1310自動進樣器（Thermo Scientific）

恒溫水浴鍋、離心機、天平、漩渦混合器、氮吹儀、固相萃取儀（Thermo Scientific）。

耗材

色譜柱：TG-5SilMS（30 m×0.25 mm×0.25μm）（Thermo Scientific,PN: 26096-1421）C18 SPE柱，500 mg，3mL（Thermo Scientific）

試劑與標(biāo)準(zhǔn)品

地xi泮和安mian酮標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：濃度200μg/ml；

正己烷、乙腈、甲醇：色譜chun(Thermofisher)。