三聚氰胺（Melamine）簡(jiǎn)稱三胺，學(xué)名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。三聚氰胺含氮量為66.6％，折合成粗蛋白含量為416.27%，加入寵物飼料和牛奶中可以大幅提高蛋白質(zhì)測(cè)定表觀含量，但食用后可誘發(fā)腎衰竭并導(dǎo)致死亡，因此一直禁止在飼料和食品中使用。2007年，國(guó)內(nèi)外發(fā)生多起寵物因食用添加了三聚氰胺的寵物食品而致死的例子，大量相關(guān)產(chǎn)品被召回。2008年9月，國(guó)內(nèi)發(fā)生奶粉中三聚氰胺導(dǎo)致嬰幼兒腎結(jié)石和腎功能衰竭甚至死亡的惡性事件。

本文參考農(nóng)業(yè)部NY/T 1372-2007飼料中三聚氰胺測(cè)定方法中的樣品提取純化過程，采用反相離子對(duì)色譜法測(cè)定奶粉中三聚氰胺含量，重現(xiàn)性好，靈敏度高。

儀器概況

　　本實(shí)驗(yàn)使用島津Prominence LC-20A液相色譜儀系統(tǒng)。LC-20A是島津制作所投入整體力量開發(fā)的新一代液相色譜儀，具有以下特點(diǎn)：*的基本性能，輕松滿足客戶對(duì)儀器嚴(yán)格的要求；全自動(dòng)化操作，實(shí)現(xiàn)了分析的率；高度對(duì)應(yīng)網(wǎng)絡(luò)要求的綜合管理系統(tǒng)，改善分析工作環(huán)境。

　　本次實(shí)驗(yàn)所用儀器的具體配置為L(zhǎng)C-20AD輸液泵，DGU-20A3在線脫氣，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-20AC柱溫箱，SPD-20A紫外可見檢測(cè)器，CBM-20A控制器和LCsolution色譜工作站。

分析方法
色譜柱：Inertsil C8 4.6×250mm 5μm
檢測(cè)波長(zhǎng)：235nm
流動(dòng)相：含10mM檸檬酸和10mM辛烷磺酸鈉的緩沖液(pH3.0):甲醇=7:3
流速：1mL/min
柱溫：40℃
進(jìn)樣量：10μL
洗脫方式：等度洗脫。

樣品前處理方法
　　參考農(nóng)業(yè)部NY/T 1372-2007飼料中三聚氰胺測(cè)定方法中的樣品提取純化過程，并進(jìn)行適當(dāng)修改，具體步驟如圖1所示。

圖1 前處理步驟

分析結(jié)果
1.保留時(shí)間與峰形
　　圖2為本方法檢測(cè)三聚氰胺標(biāo)樣的典型色譜圖（樣品濃度為1μg/mL）

圖2 三聚氰胺標(biāo)樣圖譜

　　由圖2可見，本方法所測(cè)三聚氰胺保留時(shí)間為11.02min，峰形尖銳，對(duì)稱性好。
2.精密度
　　取濃度為5μg/mL三聚氰胺標(biāo)樣，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果如表1所示。

編號(hào)	保留時(shí)間(min)	峰面積(μV.S)
1	11.016	214256
2	11.014	214205
3	11.014	214183
4	11.014	214292
5	11.013	214189
Average	11.014	214225
%RSD	0.01	0.022

 

表1 保留時(shí)間與峰面積的重現(xiàn)性

　　由表1結(jié)果可見，本方法測(cè)定三聚氰胺具有很好的精密度和重現(xiàn)性。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
　　取標(biāo)準(zhǔn)品，用緩沖液稀釋成濃度為0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別進(jìn)樣，得到校準(zhǔn)曲線(見圖3)。

圖3 校準(zhǔn)曲線

　　結(jié)果表明，該方法線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9999。
4.加標(biāo)回收率
　　取奶粉空白樣品，分別加入不同濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，使其三聚氰胺終含量分別為0.5mg/kg，5mg/kg，結(jié)果如下：

圖4 空白奶粉

圖5 空白奶粉添加0.5mg/kg三聚氰胺

圖6 空白奶粉添加5mg/kg三聚氰胺

　　扣除空白奶粉后的加樣回收率結(jié)果如表2所示。
 

加樣量(mg/kg)	計(jì)算結(jié)果(mg/kg)	回收率 %	平均回收率%
0.5	0.55	96	110
	0.64	114
	0.67	120
5.0	4.68	95.8	96.0
	4.80	94.6
	4.95	97.6

 

表2   2個(gè)不同濃度樣品回收率

5.檢測(cè)限和定量限
　　用軟件計(jì)算出奶粉中三聚氰胺含量檢測(cè)限為0.026mg/kg，定量限為0.079mg/kg。
6.實(shí)際樣品分析結(jié)果
　　按本方法測(cè)定某品牌的奶粉，得到的圖譜如圖7所示。兩份重復(fù)樣品中測(cè)得三聚氰胺的濃度分別為19.1和19.2mg/kg，重現(xiàn)性良好。

圖7 某品牌陽性樣品檢測(cè)結(jié)果

結(jié)論
　　本方法定量限為0.079mg/kg，具有靈敏度高和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，適用于奶粉中三聚氰胺含量的準(zhǔn)確測(cè)定，特別是低含量樣品的檢測(cè)。