三聚氰胺（Melamine）簡稱三胺，學名三氨三嗪，別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。三聚氰胺含氮量為66.6％，折合成粗蛋白含量為416.27%，加入寵物飼料和牛奶中可以大幅提高蛋白質測定表觀含量，但食用后可誘發(fā)腎衰竭并導致死亡，因此一直禁止在飼料和食品中使用。2007年，國內外發(fā)生多起寵物因食用添加了三聚氰胺的寵物食品而致死的例子，大量相關產品被召回。2008年9月，國內發(fā)生奶粉中三聚氰胺導致嬰幼兒腎結石和腎功能衰竭甚至死亡的惡性事件。
　　本文建立對乳制品中三聚氰胺的單四級桿液質分析測定方法，以電噴霧離子化方式正離子模式監(jiān)測，化合物的[M+H]+作為定量分析用的選擇性檢測離子,解決有時在液相分析時色譜分離不*及定性信息不充分的問題, 從而避免液相色譜紫外測定時樣品假陽性情況。

1. 實驗及方法
1.1 裝置概要
　　本實驗使用Shimadzu LCMS-2010EV液相質譜儀，C-20AD輸液泵，SIL-20AC自動進樣器，CTO-20AC柱溫箱,含LC-20AD輸液泵，SIL-20AC自動進樣器，CTO-20AC柱溫箱，DGU-20A3在線脫氣機, LCMSsolution 3.20工作站軟件。

1.2 試劑
　　甲醇：　色譜純
　　乙腈：　色譜純
　　氨水：　濃度25%-28%
　　　　　　飽和乙酸鉛溶液
　　緩沖液：配制含10mM檸檬酸和10mM辛烷磺酸鈉的緩沖液，調節(jié)pH值到3.0
　　氨水甲醇溶液：量取5mL氨水，溶解于100mL甲醇中

1.3 樣品前處理
　　固體樣品取樣2g，液體樣品取樣5g，準確加入9mL緩沖液溶液，加入1mL乙酸鉛溶液。搖勻，劇烈震蕩25min，10000r/min離心5min，取上清液。分別用3mL甲醇，3mL水活化混合型陽離子交換固相萃取柱，加入2mL（液體樣品3mL）上清液上柱。依次用0.1mol/L鹽酸水溶液3mL水和甲醇3mL洗柱，抽近干后用氨水甲醇溶液3mL洗脫。洗脫液50℃氮氣吹干，殘渣用70％乙腈溶解，0.45um濾膜過濾，上機測定。

1.4 分析條件
　　色譜柱：CAPCELL PAK CR（1:4） 4.6×150mm ,5μm；
　　流動相：乙睛/10mM NH4Ac (50:50)，
　　　　　    冰醋酸調節(jié)混合液至pH=3；
　　流速：    1.5mL/min (約0.3mL/min進質譜)；
　　柱溫：    30℃；
　　進樣量：10μL；
　　質譜參數：電噴霧離子化ESI(＋)，
　　　　　　    霧化氣: 1.5L/min，
　　　　　　    干燥氣: 0.1MPa，
　　　　　　    CDL 溫度：250℃，
　　　　　　    加熱塊溫度：200℃，
　　　　　　    檢測器電壓: 1.6 kV。

2. 實驗結果
2.1 掃描方式結果見圖1及圖2

圖1　 TIC (+)


圖2 　SCAN (+) [M+H]+ m/z 127

2.2 標準曲線
　　三聚氰胺標準儲備液：稱取50mg（到0.1mg）的三聚氰胺標準品，用70%乙腈溶液溶解并定容于100mL容量瓶中，該溶液濃度為0.5mg/mL。
　　稀釋標準儲備溶液分別得到0.1μg/mL, 0.5μg/mL, 1μg/mL, 5μg/mL, 10μg/mL,50μg/mL分別進樣，得到校準曲線如圖3所示。質譜分析中選擇性離子監(jiān)測方式(SIM), m/z 127

圖3 標準曲線

　　標準曲線方程Y = 410,165.3X + 261,083.0 (Y- 峰面積) 相關系數為0.9996，線性關系良好, 檢出限為50ppb

2.3   標準品精密度數據
　　取濃度為1μg/mL三聚氰胺標樣，連續(xù)進樣5次，結果如表1所示。

　　表1 保留時間與峰面積的重現性

　

　由表1結果可見，本方法測定三聚氰胺具有良好的精密度和重現性。

2.4   樣品譜圖結果
　　實際樣品譜圖結果見下圖

圖4 空白液態(tài)奶



圖5 空白液態(tài)奶加標準品

3. 結論
島津單四級LCMS-2010EV分析乳制品三聚氰胺可以避免液相色譜紫外檢測樣品時假陽性結果, 并且其成本比使用串聯質譜分析低, 可以很好的滿足乳制品中三聚氰胺的分析測定要求。