帕米膦酸二鈉注射液（Pamidronate Disodium Injection）為帕米膦酸二鈉 加適量甘露醇制成的滅菌水溶液。帕米膦酸二鈉是一種雙膦酸類骨吸收抑制 劑，臨床上廣泛應用于治療骨質疏松癥、腫瘤并發(fā)的高鈣血癥和變形性骨炎 [1]。目前液相色譜法測定帕米膦酸二鈉及其制劑的方法主要有熒光檢測高 效液相色譜法[2, 3]、蒸發(fā)光散射液相色譜法[4]和示差折光檢測液相色 譜法[5]。由于熒光檢測需要柱前衍生，步驟繁瑣；蒸發(fā)光檢測需要用到離子對 試劑，對實驗條件要求較高，重現(xiàn)性較差；示差折光檢測的靈敏度較低等原 因，故本文采用離子色譜法建立了帕米膦酸二鈉注射液的含量檢測方法。

帕米膦酸含有一個氨基和兩個膦酸基團，為雙性離子，通過一定PH 抑制其中一方向電離，可以通過離子色譜進行分離。而中性情況下其帶負 電荷較多，可以通過電導檢測器進行檢測。如果使用陰離子交換離子色譜 分離，由于雙膦酸基團價態(tài)較高，疏水性較強，所以適宜使用疏水性弱的 柱子來進行分離。曾實驗過疏水性極弱的Dionex IonPac AS16，疏水性低 的Dionex IonPac AS19，及疏水性中低的Dionex IonPac AS11－HC進行實 驗，用OH梯度進行淋洗，但均出現(xiàn)峰分叉明顯，峰擴展寬等情況，可能受 其氨基的影響。而使用碳酸鹽作為淋洗液的分離柱，如親水性強的Dionex IonPac AS22，則由于保留太強無法出峰。如使用酸作為淋洗液，則可抑制 其電離，使其保持較低的價態(tài)，從而加快出峰。但由于酸只能用非抑制型電 導檢測，因此使用非*電離的有機酸比*電離的無機酸有助于降低背景 值。且多價態(tài)的酸其電離類似于膦酸，更有利于洗脫，故選用草酸，鄰苯二 甲酸等進行試驗。鄰苯二甲酸pKa1=2.95 pKa2=5.41，草酸的PKa1=1.23, Pka2=4.19，因此相同摩爾濃度的淋洗液，草酸由于電離更強，抑制雙膦酸 電離效果更明顯，帕米膦酸出峰更早。且在草酸淋洗液中，帕米膦酸響應更 強，相同濃度的峰高為其在鄰苯二甲酸淋洗體系中的20倍。因此使用草酸進 行后續(xù)實驗。

測試條件
儀器：賽默飛ICS系列離子色譜。 分析柱：IonPac AS22+IonPac AG22，4 mm 流動相組成：草酸3 mM 流速：1.2 mL/min 柱溫：30 ℃
檢測方式：直接電導檢測
進樣量：25 µL 樣

樣品前處理
注射液按測試條件下的規(guī)定稀釋后直接進樣。

結果與討論
1. 方法專屬性考察
取對照品儲備液，加水制成濃度約為0.45 mg/mL 的對照品溶液，與供試品溶液、空白輔料溶液和水在 上述色譜條件下分別進樣，帕米膦酸二鈉的保留時間為 7.07 min，理論板數(shù)按帕米膦酸二鈉計為5010，分離效果 好，空白輔料溶液無干擾，見圖1。 

考察了色譜柱溫度分別為30 ℃、35 ℃和40 ℃時的色 譜行為，當溫度逐漸升高時，保留時間逐漸增大，帕米 膦酸二鈉峰的理論板數(shù)逐漸減小，故柱溫為30 ℃。

 

3. 草酸溶液濃度的影響
考察了草酸溶液濃度（2 mmol/L~10 mmol/L）的影 響（如圖2所示），當草酸溶液濃度逐漸增大時，帕米膦 酸二鈉保留時間減小，帕米膦酸二鈉主峰與水溶液的負 峰逐漸接近，為了保證分離效果和節(jié)省分析時間，確定 草酸溶液濃度為3 mmol/L。

4. 線性與檢出限
精密量取對照品儲備液5、5、3、5、5、2、2 mL分 別置20、25、20、50、100、50、100 mL量瓶中，加 水稀釋至刻度，在上述色譜條件下進樣分析，以溶液濃 度（mg/mL）為橫坐標Y，峰面積（ µs*min）為縱坐標 X，進行線性回歸，回歸方程為：Y=31.559X-0.1407， 相關系數(shù)為r＝0.9996，表明帕米膦酸二鈉在濃度 0.07～0.92 mg/mL范圍內線性關系良好。
取對照品儲備液逐級稀釋并注入離子色譜儀，其檢 測限和定量限分別為0.2 µg/mL和0.7 µg/mL。

 

5. 儀器精密度試驗
   取供試品溶液連續(xù)進樣6次，測定峰面積，其RSD 為0.2％，結果表明，精密度良好。

6. 穩(wěn)定性試驗
  取供試品溶液于配制后0，1.5，3，4，5，6小時分 別進樣，其峰面積的RSD為0.2％，表明供試品溶液在6 小時內是穩(wěn)定的。

7. 含量測定的回收率試驗
按帕米膦酸二鈉注射液處方，分別取帕米膦酸二 鈉對照品與輔料適量，精密稱定，配成相當于標示量 80％、100％和120％ 3個濃度的溶液，每個濃度3份，照 上述色譜條件進行測定。其低、中、高3種濃度加入量的 回收率（n=3）分別為99.6％（RSD=0.2%），100.0％ （RSD=0.3%），100.1％（RSD=0.5%），平均回收率 為99.9％（n=9）。

 

8. 實際樣品的分析
取本品3批，按“1.4.2”項下制備供試品溶液，進樣 測定，其結果見表1。

 

結論
本文所建立的賽默飛ICS系列離子色譜測定帕米膦酸二鈉注射液 的含量的方法，準確、靈敏、簡便，可用于帕米膦酸二 鈉注射液的質量控制，并為帕米膦酸二鈉其他制劑的含 量測定提供了參考。

 

[參考文獻]
[1] 鐘永祥, 張祥斌. 帕米膦酸二鈉的臨床應用進展 [J]. 中華全科醫(yī)師雜志, 2005, 4 (1): 27-29. [2] 劉愛芹, 馬淑濤. 液相色譜法測定注射用帕 米膦酸二鈉的含量[J]. 中國藥業(yè), 2007, 16 (21): 12-13. [3] 孔俐文, 胡志遠, 王東凱, 黎玲, 宋揚, 蘇娟娟. 反 相液相色譜法測定帕米膦酸二鈉的含量[J]. 中國藥房, 2007, 18 (1): 60-61. [4] 謝贊, 蔣曄, 田書霞. 反相離子對色譜-蒸發(fā)光散 射法測定帕米膦酸二鈉及其有關物質[J]. 藥物分 析雜志, 2006, 26 (12): 1729-1732. [5] USP-NF[S].30. 2007: 2848.