摘要：本實驗是使用Oasis® PRiME HLB處理動物源性樣品基質(zhì)，建立了動物肌肉樣 品中168種獸藥殘留同時檢測的方法。樣品經(jīng)酸化乙腈溶液提取，利用Oasis® PRiME HLB固相萃取小柱通過式凈化處理除去磷脂，UPLC-MS/MS檢測。在經(jīng) 過前處理方法與儀器條件優(yōu)化后，添加濃度為0.5~10 µg/kg的范圍內(nèi)時，磺胺、 喹諾酮、氯霉素、β-受體激動劑、四環(huán)素、糖皮質(zhì)激素、大環(huán)內(nèi)酯、硝基咪唑、苯 并咪唑、內(nèi)酰胺、金剛烷胺、頭孢、性激素、鎮(zhèn)靜劑、阿維菌素、孔雀石綠、喹乙 醇、玉米赤霉醇、抗菌劑、抗球蟲劑、殺蟲劑、非甾體類抗炎藥、氨苯砜等23類， 共168種藥物回收率在20%-120%，精密度RSD<20%(n=5)。

前言：獸藥被廣泛的應(yīng)用于治療或預(yù)防動物疾病。動物在使用獸藥后，在細 胞、組織或器官內(nèi)蓄積或儲存藥物原型、有毒性的代謝物或雜質(zhì)，形成獸藥殘留 (Veterinary drug residue)。我國在畜牧養(yǎng)殖方面使用較多的獸藥主要有磺胺 類、喹諾酮類、β-受體激動劑類、糖皮質(zhì)激素類、氯霉素類、頭孢類等化合物。 濫用獸藥易造成畜牧產(chǎn)品及環(huán)境的嚴重污染，并通過代謝途徑進入畜禽產(chǎn)品中， 最終被人體攝入并蓄積，導(dǎo)致過敏反應(yīng)且使人體產(chǎn)生抗藥性等副作用。因此，監(jiān) 測多種獸藥在豬肉為代表的肉制品中的殘留對保證肉制品的安全具有積極意義。 目前，相關(guān)標準和文獻報道的多獸藥殘留的同時檢測方法大多按照獸藥種類分 成若干種檢測方法，對于日益增長的檢測量而言需要耗費大量的人力物力，因此 亟需一個統(tǒng)一簡便的多殘留檢測方案。 此創(chuàng)新的填料能夠有效的將樣品基質(zhì)中的蛋白、磷脂等干擾雜質(zhì)去除干凈。采 用Waters UPLC/Xevo® TQ-XS系統(tǒng)，結(jié)合QuanpediaTM數(shù)據(jù)庫，建立穩(wěn)定高效 的多獸藥殘留液相色譜串聯(lián)四極桿分析方法，獲得準確分析結(jié)果。

儀器，試劑與材料 Waters ACQUITY UPLC® I-Class FTN，Waters Xevo TQ-XS三重四極桿質(zhì)譜，純水機，Milli-Q，臺式高速離心機，旋渦振蕩儀，移液 槍，乙腈，Oasis PRiME HLB固相萃取柱(200 mg，6 CC) 樣品前處理 稱取2.5 g均質(zhì)好的肉樣，加入80%乙腈水溶液(含0.2 %甲酸)10 mL，旋渦振蕩，4000 r/min高速離心5min，取上清液待凈化。 取Oasis PRiME HLB固相萃取柱，無需活化與平衡，將3 mL上清液 過固相萃取柱，保持一秒一滴的流速，收集全部流出液，然后再準 確量取2 mL流出液，氮氣下吹干，1 mL 初始流動相定容，過GHP濾 膜，待上機測試。

流速： 0.45 mL/min 柱溫： 45 ?C 樣品溫度： 10 ?C 進樣量： 2 µL 質(zhì)譜條件 離子源： ESI+/ ESI采集方式： MRM 毛細管電壓： 3.5 kV 離子源溫度： 150 ?C 脫溶劑氣溫度： 600 ?C 脫溶劑氣流速度： 1000 L/h 錐孔氣： 150 L/h 碰撞其流速： 0.15 mL/min

結(jié)果與討論 樣品處理的優(yōu)化 應(yīng)用中使用甲酸酸化的乙腈溶液提取目標化合物，同時沉淀蛋白。 由于過高的甲酸添加量會對磺胺類等化合物回收率有影響，故本試 驗中選取添加0.2%的甲酸于提取液中，且經(jīng)比較，0.2%甲酸乙腈 溶液能提高喹諾酮類等30多種化合物的回收率。 大量存在于動物源性樣品中的磷脂，干擾部分化合物分析定量，影 響色譜柱壽命及儀器維護成本。利用Oasis PRiME HLB固相萃取小 柱凈化樣品，能有效去除磷脂等干擾雜質(zhì)。同時，采用通過式凈化 策略能極大提高樣品分析通量，并且經(jīng)過特殊設(shè)計的Oasis PRiME HLB流速更快且不容易被堵，也極大的提高了效率。儀器方法的優(yōu)化 本實驗室UPLC-MS/MS方法的建立過程使用Waters Quanpedia 數(shù)據(jù)庫，庫中包含了1000多種化合物的LC-MS/MS方法，涵蓋了幾 乎所有食品檢測要求的獸藥種類。Waters Quanpedia數(shù)據(jù)庫操作 簡便，是包含了從液相條件、采集方法到定量處理方法的完整方法 包，能大大節(jié)約方法開發(fā)時間，避免實驗室間方法開發(fā)的差異。

方法回收率和精密度 采用在空白樣品中添加標準溶液的方法進行添加回收率測定。分別 添加0.5 µg/kg、1.0 µg/kg、2.0 µg/kg、10 µg/kg 4個濃度水平，按 所建立的方法進行樣品處理及測定，每個濃度水平進行3次重復(fù)測 定。方法采用空白基質(zhì)標準曲線，外標法定量。各添加水平的回收 率分布如右圖。

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結(jié)論 ■ 實驗成功建立了同時測定23大類共168種獸藥殘留的分析方法。分析結(jié)果滿足動物源性食品中獸藥殘留 檢測的相關(guān)要求。 ■ Oasis PRiME HLB固相萃取柱簡單的通過式凈化處理能有效去除樣品中磷脂等干擾物，且處理過程簡單 高效，適用于大批量日常分析檢測。 ■ Waters Quanpedia數(shù)據(jù)庫包含多獸藥殘留分析所需的LC-MS/MS方法，能節(jié)約方法開發(fā)成本，避免實驗 室間方法差異。