前言 甲砜霉素是氯霉素的同類(lèi)物，抗菌譜和抗菌作用與氯霉素相仿，具廣譜抗微生 物作用，主要用于畜禽的細(xì)菌性疾病，尤其是大腸桿菌、沙門(mén)氏菌及巴氏桿菌感 染。隨著氯霉素的禁用，甲砜霉素開(kāi)始廣泛用于動(dòng)物飼料以及獸藥中，進(jìn)而造成 動(dòng)物性食品如牛奶和畜肉產(chǎn)品中有少量的甲砜霉素殘留，對(duì)人體健康也造成一定 的損害。目前，人們普遍認(rèn)為甲砜霉素防治畜禽疫病的，鑒于動(dòng)物飼料 生產(chǎn)商或者養(yǎng)殖戶(hù)任意加大甲砜霉素用量，為監(jiān)控動(dòng)物性食品中該藥的殘留，歐 共體和我國(guó)均規(guī)定其在食品動(dòng)物各組織中的最高殘留*為 0.05 mg/kg。 本文所述方法參照 GB 29689-2013 國(guó)標(biāo)方法，建立了一種牛奶中甲砜霉素殘留分 析的高效液相色譜法。該方法采用乙腈對(duì)牛奶樣品中甲砜霉素進(jìn)行提取，同時(shí) 使用 Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱對(duì)樣品進(jìn)行凈化，并利用安捷倫 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色譜柱對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行快速分析。該方法適用于牛奶 中甲砜霉素殘留量的檢測(cè)，*國(guó)標(biāo)方法對(duì)于牛奶中甲砜霉素殘留量檢測(cè) 要求。

甲砜霉素分析 對(duì)試樣進(jìn)行樣品前處理：稱(chēng)取試料 5 ± 0.05 g（購(gòu)買(mǎi)于當(dāng)?shù)爻校?，?50 mL 離心 管中；加乙腈 10 mL，渦旋 1 min，超聲 10 min，5000 r/min 0 oC 低溫離心 5 min， 取上清液于 50 mL 離心管中；殘?jiān)屑右译?10 mL，重復(fù)提取一次，合并兩次提 取液，于 45 oC 氮?dú)獯祾咧两?；加去離子水 10 mL 于離心管中，超聲 5 min 使充 分溶解，加 20 mL 正己烷，振蕩 5 min，5000 r/min 0 oC 低溫離心 5 min，丟棄上層 正己烷層（包含兩項(xiàng)間的脂肪膜），用氮?dú)獯祾呷コ龤堄嗟恼和?，取下層溶?待凈化。所得樣品提取液經(jīng) Agilent Bond Elut C18 固相萃取小柱凈 化和富集后，使用配備了 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色譜 柱的高效液相色譜系統(tǒng)對(duì)其中的甲砜霉素殘留進(jìn)行快速分 析，圖 1 所示為固相萃取操作流程，表 1 所示為液相色譜分 析條件。

如圖 2 所示，采用 Poroshell 120 EC-C18 快速色譜柱，單次運(yùn)行 10 分鐘內(nèi)即可完成樣品分析，比原國(guó)標(biāo)方法節(jié)約近一半時(shí)間。 經(jīng)乙腈萃取沉淀蛋白并經(jīng) Bond Elut C18 固相萃取凈化后的樣 品，其色譜圖中甲砜霉素出峰位置沒(méi)有基質(zhì)干擾的存在，表 明此方法有效的去除了干擾雜質(zhì)，如圖 3 所示。50 µg/kg 添 加水平的牛奶樣品連續(xù)進(jìn)樣六次考察重復(fù)性（見(jiàn)圖 4），六次 進(jìn)樣峰面積響應(yīng) RSD 為 0.91%，表明儀器系統(tǒng)具有很好的穩(wěn) 定性。如圖 5 和表 2 所示，本文所述方法在 20 ~ 1000 ng/mL 線(xiàn)性范圍內(nèi)甲砜霉素的線(xiàn)性相關(guān)性良好；在 10-100 µg/L 的 添加水平下，甲砜霉素的平均回收率為 75.0% ~ 95.0%，RSD ≤ 10% (n = 3)。

本文所述方法參照 GB 29689-2013 國(guó)標(biāo)方法，但也對(duì)國(guó)標(biāo)方 法進(jìn)行了一定程度的優(yōu)化，采用乙腈作為提取溶劑，是因 為乙腈不但可以保證對(duì)甲砜霉素的提取，對(duì)蛋白的沉淀效 果優(yōu)于國(guó)標(biāo)方法中所使用的提取溶劑乙酸乙酯，提取脂肪 的能力卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)弱于乙酸乙酯。該方法不但大大提高了牛奶 中甲砜霉素的檢測(cè)效率和檢測(cè)通量，而且減少了分析過(guò)程 中的溶劑的消耗，同時(shí)大大減少了對(duì)環(huán)境的污染，在普通 液相色譜系統(tǒng)上即可實(shí)現(xiàn)牛奶中甲砜霉素殘留量的快速高 效檢測(cè)。