摘要通過(guò) GC/MS/MS氣質(zhì)聯(lián)用儀 分析多種水果和蔬菜中的痕量農(nóng)藥，全面評(píng)估和驗(yàn)證了安捷倫惰性流路 (IFP) 解決方案。結(jié)果顯示惰性流路使整個(gè)氣相色譜流路具備出色的表面惰性，從而減少了表明活性位點(diǎn)對(duì)目標(biāo)分析物的不利影響。此外，通過(guò)與配備相應(yīng)去活組件的非安捷倫流路對(duì)比，表明安捷倫惰性流路對(duì)某些基質(zhì)中的重要農(nóng)藥具有更多優(yōu)勢(shì)。前言流路惰性對(duì)復(fù)雜樣品基質(zhì)中農(nóng)藥分析的準(zhǔn)確度、精度、穩(wěn)定性和一致性方面起著重要的作用。安捷倫惰性流路解決方案包括超高惰性色譜柱、超高惰性進(jìn)樣口襯管和分流平板，以及 UltiMetal Plus 惰性進(jìn)樣口、微板流路控制技術(shù) (CFT) 裝置和可塑金屬密封圈，使整個(gè)氣相色譜流路具備出色的表面惰性，降低表面活性位點(diǎn)對(duì)目標(biāo)分析物的不利影響。對(duì)于 GC 和 GC/MS 檢測(cè)而言，農(nóng)藥的多殘留分析一直挑戰(zhàn)性。許多農(nóng)藥分析要求獲得低 ppb 級(jí)的定量限，使分析過(guò)程變得愈加復(fù)雜。與廣泛使用的 GC/MS 相比，GC/MS/MS技術(shù)具有更好的選擇性，因而顯著降低了系統(tǒng)檢測(cè)限。

農(nóng)藥化合物通常含有羥基 (-OH)和氨基 (R-NH-)官能團(tuán)、咪唑類和苯并咪唑類化合物 (-N=)、氨基甲酸酯 (-O-CO-NH-)、尿素衍生物(-NH-CO-NH-) 和有機(jī)磷 (-P=O) 基團(tuán)。這類分子易與流路表面的活性位點(diǎn)發(fā)生相互作用，發(fā)生化合物吸附或降解。因此，保持流路惰性對(duì)于痕量農(nóng)藥分析至關(guān)重要。2003 年，QuEChERS 樣品前處理方法被 USDA 科學(xué)家引入食品中的農(nóng)藥分析 [1]。由于這種方法具有快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、高效、穩(wěn)定和安全的特點(diǎn)，迅速成為范圍內(nèi)農(nóng)藥多殘留分析的重要方法。通過(guò) LC/MS 和 GC/MS 同時(shí)對(duì) QuEChERS 萃取物中多種農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定。然而，對(duì)于 QuEChERS 處理方法而言，這類食品萃取物仍然顯得十分復(fù)雜，并且包含如高沸點(diǎn)天然化合物之類的雜質(zhì)。當(dāng)使用 GC/MS 或 GC/MS/MS 作為儀器檢測(cè)器時(shí)，QuEChERS 萃取物會(huì)導(dǎo)致分析柱和質(zhì)譜離子源污染以及性能下降，出現(xiàn)峰形較差以及活性化合物強(qiáng)度下降的情況，使結(jié)果的準(zhǔn)確性不佳。QuEChERS 萃取物也會(huì)導(dǎo)致分析柱使用壽命縮短并且需要頻繁地對(duì)質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行維護(hù)。因此，如果需要獲得可靠的結(jié)果并最大限度地保護(hù)分析柱和離子源，使用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)和備件是非常必要的。安捷倫的超高惰性組件已經(jīng)被證明可為痕量農(nóng)藥分析提供出色的表面惰性 [2-6]。在本研究中，通過(guò)分析不同水果和蔬菜基質(zhì)中的多種農(nóng)藥，對(duì)整個(gè)安捷倫惰性流路進(jìn)行評(píng)估。同時(shí)用相應(yīng)的去活組件構(gòu)建了一套非安捷倫流路，并與安捷倫惰性流路進(jìn)行對(duì)比。此外還研究了在安捷倫惰性流路中，使用分析物保護(hù)劑對(duì)敏感化合物的影響。評(píng)估和比較了基質(zhì)的校準(zhǔn)曲線線性、用于計(jì)算準(zhǔn)確度和精度的加標(biāo) QC 定量結(jié)果以及一段時(shí)間內(nèi)多次進(jìn)樣的穩(wěn)定性。通過(guò)雙層或三層進(jìn)樣裝置，以“三明治"進(jìn)樣進(jìn)行在線基質(zhì)加標(biāo)。通過(guò)進(jìn)樣一組校準(zhǔn)標(biāo)樣和“三明治"進(jìn)樣基質(zhì)空白，獲得了不同基質(zhì)的校準(zhǔn)曲線。該“三明治"進(jìn)樣技術(shù)不僅提高了分析的一致性，降低了錯(cuò)誤的制備過(guò)程帶來(lái)了潛在誤差，而且顯著減少了制備基質(zhì)匹配標(biāo)樣的工作量。本研究使用了六種不同的基質(zhì)，包括草莓、橘子、李子、洋蔥、紅辣椒和菠菜，用于對(duì)系統(tǒng)性能進(jìn)行評(píng)估。

實(shí)驗(yàn)所 有 試 劑 和 溶 劑 均 為 HPLC 級(jí) 或 分 析 純 。 乙 腈 (ACN) 購(gòu) 自Honeywell（美國(guó)密歇根州馬斯基根）。超低殘留分析級(jí)丙酮購(gòu)自Baker 公司（美國(guó)新澤西州菲利普斯堡）。乙酸購(gòu)自西格瑪奧德里奇公司（美國(guó)密蘇里州圣路易斯）。農(nóng)藥標(biāo)樣和內(nèi)標(biāo)（磷酸三苯酯，TPP）購(gòu)自西格瑪奧德里奇公司（美國(guó)密蘇里州圣路易斯）、Chem Service 公司（美國(guó)賓夕法尼亞州西切斯特）或 UltraScientific 公司（美國(guó)羅得島州北金斯敦）。L-古洛糖酸-g-內(nèi)酯和山梨醇購(gòu)自西格瑪奧德里奇公司。

樣品制備向 100 mL 乙腈中加入 1 mL 冰醋酸制成含 1% 乙酸的乙腈溶液，作為試劑空白。上述溶液也用作 QuEChERS 方法的萃取溶劑以及制備純農(nóng)藥標(biāo)樣的空白溶劑。使用丙酮分別制備標(biāo)樣和內(nèi)標(biāo) (IS)儲(chǔ)備液 (2 mg/mL)，并儲(chǔ)存在 –20 °C 的環(huán)境中。從儲(chǔ)備液中取出適量標(biāo)樣用丙酮稀釋制備成 20 µg/mL 混合標(biāo)樣（含 33 種農(nóng)藥）。適當(dāng)稀釋單獨(dú)的農(nóng)藥儲(chǔ)備溶液，并以 20 µg/mL 磷酸三苯酯的乙腈溶液作為內(nèi)標(biāo)加標(biāo)溶液。在試劑空白中加入適量 20 µg/mL 的混合標(biāo)樣溶液制備成濃度為 2、4、10、20、40、100、150 和200 ng/mL 的八種標(biāo)準(zhǔn)溶液。向基質(zhì)空白中加入適量 20 µg/mL的混合標(biāo)樣溶液制備成 20、100、200 ng/mL 三個(gè)濃度水平的QC 溶液。然后在樣品中加入一定量的內(nèi)標(biāo)溶液使樣品濃度變?yōu)?00 ng/mL。用水制備 L-古洛糖酸內(nèi)酯儲(chǔ)備液 (50 mg/mL) 和山梨醇儲(chǔ)備液(50 mg/mL)。然后使用乙腈適當(dāng)稀釋儲(chǔ)備液制備分析物保護(hù)溶液（20 mg/mL L-古洛糖酸內(nèi)酯和 10 mg/mL 山梨醇）。將 40 µL 儲(chǔ)備液加入到 500 µL 基質(zhì)空白或試劑空白中，用于“三明治"進(jìn)樣標(biāo)樣或樣品。使用六種蔬菜和水果制備基質(zhì)空白樣品，包括草莓、橘子、李子、洋蔥、紅辣椒和菠菜。使用 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC萃取試劑盒和用于常規(guī)水果和蔬菜分析的分散 SPE 試劑盒，按照標(biāo)準(zhǔn) AOAC QuEChERS 萃取流程制備基質(zhì)空白。

儀器所有測(cè)試均使用配置 7693B 自動(dòng)進(jìn)樣器的 Agilent 7890A 氣相色譜與 7000 系列 GC/MS/MS 系統(tǒng)。32 種目標(biāo)分析物的多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM) 條件列于之前發(fā)表的出版物中 [3,5]，在本研究中也同樣采用此條件，因而在此不再重復(fù)。如前所述，MRM 方法優(yōu)化流程可以通過(guò)使用安捷倫農(nóng)藥與環(huán)境污染物 MRM 數(shù)據(jù)庫(kù)(G9250AA) 實(shí)現(xiàn)，該數(shù)據(jù)庫(kù)包含 1070 種化合物的 MS/MS 條件和保留時(shí)間信息 [7]。強(qiáng)烈建議將反吹用于復(fù)雜基質(zhì)的分析中 [8,9]。采用保留時(shí)間鎖定(RTL) 可以避免重新校正單一樣品的保留時(shí)間和時(shí)間事件，如MRM 離子對(duì) [10]。加標(biāo)樣品的總分析時(shí)間為 23 min，其中反吹2 min。對(duì)于序列中段執(zhí)行的基質(zhì)空白，使用 8 min 的快速柱箱梯度和 2 min 的反吹可節(jié)省總分析時(shí)間。色譜柱與樣品前處理色譜柱Agilent J&W HP-5ms UI，15 m × 0.25 mm，0.25 µm（部件號(hào)19091-431UI）樣品前處理Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 萃取試劑盒（部件號(hào) 5982-5755）和用于常規(guī)水果和蔬菜分析的分散 SPE 試劑盒（部件號(hào)5982-5022）

氣相色譜條件氣相色譜儀： Agilent 7890A 氣相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器： Agilent 7693 自動(dòng)進(jìn)樣器和樣品盤5 µL 進(jìn)樣針（部件號(hào) 5181-5246），1 µL 進(jìn)樣量進(jìn)樣前溶劑 A（丙酮）清洗次數(shù)：33 臺(tái)樣品泵進(jìn)樣后溶劑 B（乙腈）清洗次數(shù)：3“三明治"進(jìn)樣： 總體積 1.1 µL對(duì)于不含潔凈標(biāo)樣的基質(zhì)，執(zhí)行三層“三明治"進(jìn)樣，由0.5 µL 潔凈標(biāo)樣 + 0.5 µL 基質(zhì)空白 + 0.1 µL 試劑空白組成。對(duì)于已經(jīng)包含樣品的基質(zhì)，執(zhí)行兩層“三明治"進(jìn)樣，由0.5 µL 基質(zhì)樣品 + 0.6 µL 溶劑空白組成載氣： 氦氣，恒定壓力氣體過(guò)濾器： 用于氣質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)的氣體凈化套裝，1/8 英寸（部件號(hào)CP17974）進(jìn)樣口： UltiMetal 分流/不分流進(jìn)樣口（部件號(hào) G3970A），脈沖不分流模式，280 °C進(jìn)樣脈沖壓力： 36 psi 保持 1 min分流出口的吹掃流量：在 1 min 時(shí)，流量 50 mL/min進(jìn)樣口壓力： 運(yùn)行期間 18.35 psi（保留時(shí)間鎖定），反吹期間 1.0 psi保留時(shí)間鎖定： 甲基毒死蜱，8.298 min柱溫箱： 對(duì)于樣品分析，100 °C 保持 2 min，然后以 50 °C/min 速度升溫至 150 °C，以 6 °C/min 速度升溫至 200 °C，以 16 °C/min 速度升溫至 300 °C 并保持 2 min對(duì)于基質(zhì)空白分析，100 °C 保持 1 min，然后以 50 °C/min 速度升溫至 300 °C 并保持 1 min后運(yùn)行： 300 °C 保持 2 min（樣品分析），300 °C 保持 4 min（基質(zhì)空白分析）微板流路控制技術(shù)： UltiMetal Plus Ultimate 吹掃接頭（部件號(hào) G3182-61581），用于反吹分析柱和進(jìn)樣口輔助 EPC 氣體： 氦氣通入 Ultimate 吹掃接頭排氣管： 0.0625 英寸外徑 × 0.010 英寸內(nèi)徑 × 100 cm，316 不銹鋼管，柱溫箱頂部輔助氣壓力： 運(yùn)行過(guò)程 4 psi，反吹過(guò)程 75 psi接頭： 連接進(jìn)樣口與 Ultimate 吹掃接頭限流器： 惰性熔融石英管，0.65 m × 0.15 mm（部件號(hào) 160-7625-5）接頭： 連接 Ultimate 吹掃接頭與 MSDMSD 條件MSD： Agilent 7000 三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，惰性，配備高性能電子元件真空泵： 高性能渦輪泵模式： MRM調(diào)諧文件： Atune.u傳輸線溫度： 280 °C四極桿溫度： 300 °C四極桿溫度： Q1 和 Q2 均為 150 °C溶劑延遲： 2.3 min碰撞氣體流量： 氦氣淬滅氣流量 2.35 mL/min，氦氣碰撞氣流量 1.5 mL/min質(zhì)譜分辨率： MS1 和 MS2 = 1.2 u

流路備件樣品瓶： 棕色螺口蓋（部件號(hào) 5182-0716）樣品瓶蓋： 藍(lán)色螺口蓋（部件號(hào) 5182-0717）樣品瓶?jī)?nèi)插管： 150 µL 玻璃內(nèi)插管，帶聚合物支腳（部件號(hào) 5183-2088）隔墊： 高級(jí)綠色不粘連隔墊，11 mm（部件號(hào) 5183-4759）密封圈： 內(nèi)徑 0.4 mm，85/15 Vespel/石墨進(jìn)樣口密封圈（部件號(hào) 5181-3323），內(nèi)徑 0.4 mm，85/15 Vespel/石墨質(zhì)譜接口密封圈（部件號(hào) 5062-9526），UltiMetal Plus 可塑金屬密封圈（部件號(hào) G3188-27501）微板流路控制技術(shù)：Ultimate 吹掃接頭（部件號(hào) G3182-61581）內(nèi)螺母： 部件號(hào) G2855-20530排氣管： 0.0625 英寸外徑 × 0.010 英寸內(nèi)徑 × 100 cm，316 不銹鋼管（部件號(hào) 0100-2354）三通： 1/16 英寸黃銅 Swagelok 接頭（部件號(hào) 0100-0680）三通低流失密封圈：1/16 英寸 Vespel 密封圈，10/包（部件號(hào) 0100-1329）進(jìn)樣口密封墊： 超高惰性分流平板進(jìn)樣口密封墊，帶墊圈（部件號(hào) 5190-6144）進(jìn)樣口襯管： 帶玻璃毛的安捷倫超高惰性脫活單細(xì)徑錐襯管，帶預(yù)裝的不粘連 O 形圈（部件號(hào) 5190-2293）表 1 中列出了安捷倫惰性流路與其他非安捷倫廠商惰性流路的配置比較，后者也同樣使用了類似的脫活組件。本研究在熱不分流模式下使用分流/不分流進(jìn)樣口。雖然強(qiáng)烈推薦在農(nóng)藥分析中使用多模式進(jìn)樣口 (MMI) [11]，但是分流/不分流進(jìn)樣口同樣也是此類應(yīng)用中常用的進(jìn)樣口。因?yàn)?MMI 可以在冷不分流或大體積進(jìn)樣模式下操作，并且活性分析物在低溫條件下表現(xiàn)更好，使得 MMI 在分析許多活性分析物時(shí)表現(xiàn)出良好的性能。

進(jìn)樣順序常規(guī)樣品批次一共包括 72 次進(jìn)樣，包括試劑空白、基質(zhì)空白、六組三個(gè)不同濃度的基質(zhì)加標(biāo) QC、一組八個(gè)不同濃度的校準(zhǔn)標(biāo)樣。在大約 10 次進(jìn)樣后注射一組 QC，但是第十次進(jìn)樣到第二十次進(jìn)樣除外，此間進(jìn)樣校準(zhǔn)標(biāo)樣。必要時(shí)在 QC 和標(biāo)樣之間進(jìn)樣基質(zhì)空白。在分析大多數(shù)基質(zhì)空白時(shí)采用快速升溫程序，以縮短整個(gè)序列的儀器運(yùn)行時(shí)間。

結(jié)果與討論本測(cè)試評(píng)估了采用 GC/MS/MS 法分析水果和蔬菜基質(zhì)中農(nóng)藥的安捷倫惰性流路。評(píng)估和比較結(jié)果根據(jù) 2 到 200 ng/mL 范圍內(nèi)的校準(zhǔn)曲線線性 (R2) 得出?；|(zhì)加標(biāo) QC 的準(zhǔn)確度根據(jù)回收率得出，精度根據(jù) %RSD 和 95% 置信區(qū)間 (CI) 得出。對(duì)于每個(gè)序列，基于 n = 18 計(jì)算每種農(nóng)藥的平均 QC 回收率和 %RSD 或 95% CI。由于包含 3 種不同濃度的 QC，在 70 次進(jìn)樣中運(yùn)行了六組 QC，平均 QC 準(zhǔn)確度和精度數(shù)據(jù)不僅可反映多次基質(zhì)樣品進(jìn)樣的方法重復(fù)性，同時(shí)揭示了低濃度到高濃度的響應(yīng)線性。