前言：全氟烷基物質(zhì) (PFAS) 是一大類高度氟化的脂肪族化合物，具有高度的熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性，表面活性高 [1]。在過去幾十年里，它們已廣泛應(yīng)用于工業(yè)制造，如制冷劑、麻醉劑、殺蟲劑、除草劑、潤滑劑和涂料等。PFAS 耐水解、光解和生物降解，因此屬于持久性有機污染物。工業(yè)制造帶來的環(huán)境污染使 PFOA 和 PFOS 成為在食物鏈中發(fā)現(xiàn)得越來越多的兩種主要化合物。它們已在許多基質(zhì)中被檢測到，如水 [2,3]、沉積物和淤泥 [4]、禽類、魚類、其它水生生命，還有蛋清 [5,6] 等。生物積聚使人類暴露在 PFOA和 PFOS 中的風(fēng)險越來越來大，甚至在人乳中也已發(fā)現(xiàn)這兩種化合物的存在 [3]。對實驗動物的研究已經(jīng)證實，PFAS 會對健康造成多種不良影響，包括肝臟毒性、發(fā)育毒性、神經(jīng)行為毒性、免疫毒性、生殖毒性、肺臟毒性和激素效應(yīng)等等 [1]。近來的一項流行病學(xué)研究表明，PFAS 暴露的增加與兒童常規(guī)免疫接種的體液免疫反應(yīng)下降有關(guān)[7]。2008 年，EFSA（歐洲食品安全局）推薦了 PFOS 和 PFOA的每日耐受攝入量 (TDI) 分別為每千克體重 150 ng 和每千克體重1500 ng [8]。因此，開發(fā)一個對食品中 PFAS 含量進行常規(guī)監(jiān)測的高靈敏度、高選擇性的可靠分析方法就非常重要。為了測定食品中 PFAS 的含量，我們已經(jīng)主要針對環(huán)境設(shè)置開發(fā)了許多方法。我們努力開發(fā)了一種具有高靈敏度和準(zhǔn)確性的快速參考方法，用來監(jiān)測全中國范圍內(nèi)動物源性食品中 PFOS 和 PFOA 的含量。

實驗部分試劑和材料PFOA (MW: 414.10) 和 PFOS (MW: 538.22) 購自 AccuStandard公司（美國）。圖 1 展示了其分子結(jié)構(gòu)。13C8-PFOA 和 1, 2, 3, 4-13C4- PFOS 標(biāo)準(zhǔn)化合物分別購自 Wellington Laboratories 公司（加拿大安大略省圭爾夫市）和 Cambridge Isotope Laboratories公司（美國）。甲醇、乙酸銨、乙酸和氫氧化銨為 HPLC 級，購自Fisher Scientific 公司（美國新澤西州費爾勞恩）。整個實驗中使用 Mill-Q 超純水。所有其它試劑均為分析級。取購買的標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇制備 PFOA、PFOS、13C8-PFOA 和 1, 2, 3,4-13C4- PFOS 的貯備標(biāo)準(zhǔn)溶液，終濃度分別為 100.00、100.00、10.00 和 50.00 ng/mL。取貯備標(biāo)準(zhǔn)溶液 (100 ng/mL) 用甲醇稀釋制備系列校準(zhǔn)溶液，PFOA的終濃度為 0.010、0.020、0.10、1.00、2.00 和 10.0 ng/mL，PFOS 的終濃度為 0.10、0.20、1.00、10.0、20.0 和 100.0 ng/mL。將 13C8-PFOA 和 1, 2, 3, 4-13C4-PFOS 加入上述校準(zhǔn)溶液中，使其終濃度分別為 1.00 ng/mL 和 5.00 ng/mL。

魚、蝦和蛋類樣品實驗中采用的許多食物樣品來自魚、蝦和蛋類這三種基質(zhì)。將去掉外皮的這些基質(zhì)樣品首先在一個聚乙烯容器中攪勻，并放置在–18 °C 下冷凍備用。測定基質(zhì)樣品中 PFOS 和 PFOA 的濃度。選PFOS 和 PFOA 含量低的基質(zhì)作為回收率實驗的空白基質(zhì)。

樣品制備首先將 5.00 g (± 0.01 g) 樣品與 1.0 ng 的 13C4-PFOA 和 5.0 ng 的1, 2, 3, 4-13C4-PFOS 混合，作為內(nèi)標(biāo)，用于校準(zhǔn)。然后用 10 mL甲醇提取樣品，收集甲醇層。用 10 mL 甲醇再提取殘渣兩次，將所有甲醇層混合?；旌霞状继崛∫河玫獨獯抵?1 mL。然后將 5 mL2% 甲醇加入濃縮提取液，凈化前用超聲處理 15 分鐘。采用弱陰離子交換 (WAX) 小柱對提取的樣品進行凈化。首先分別采用 2 mL 甲醇和 1 mL 水分別對小柱進行活化，再采用 2 mL 2%甲酸溶液進行平衡。然后將超聲處理過的樣品轉(zhuǎn)移到小柱上，采用 2 mL 2% 甲酸溶液進行淋洗，再依次采用 2 mL 甲醇和 4 mL 4%氫氧化銨溶液進行洗脫。收集洗脫液并用氮氣吹干。殘渣用 1 mL甲醇復(fù)溶待分析。

……

結(jié)論建立了一個采用 LC/MS液質(zhì)聯(lián)用/MS MRM 技術(shù)和弱陰離子交換小柱凈化，以同位素內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)，測定魚、蝦和蛋類中 PFOA 和 PFOS 的分析方法。方法的動態(tài)線性范圍達(dá)到三個數(shù)量級，線性相關(guān)系數(shù)不小于 0.999。PFOS 和 PFOA 的 LOD 分別為 0.002 µg/kg 和0.02 µg/kg，其 LOQ 分別為 0.01 µg/kg 和 0.1 µg/kg。在 LOQ、5 倍 LOQ 和 10 倍 LOQ 水平的加標(biāo)試驗表明，該方法準(zhǔn)確度高，加標(biāo)回收率在 79.2%–113.1% 范圍內(nèi)，RSD 在 3.2%–10.7% 范圍內(nèi) (n=6)。實驗室間驗證進一步證明了方法的可靠性，總體加標(biāo)回收率在 87.1%–105.8% 范圍內(nèi)，RSD 在 10.8%–31.4% 范圍內(nèi)。采用所開發(fā)的方法定量分析 150 個樣品，陽性率為 6.7%。該方法具有高靈敏度、高回收率和良好精密度的優(yōu)勢，因此，它可用于動物源性食品基質(zhì)的常規(guī)檢查。