前言：茶葉（茶樹(shù)）是受歡迎的飲料之一，已經(jīng)有幾個(gè)世紀(jì)的歷史。綠茶尤其以它的抗癌性和抗老化性聞名。每年，都有數(shù)以百萬(wàn)噸計(jì)的茶葉在中國(guó)和印度這樣的出口大國(guó)生長(zhǎng)成熟并出口到各地。農(nóng)業(yè)化學(xué)品如殺蟲(chóng)劑（如螨蟲(chóng)，食葉甲蟲(chóng)，毛蟲(chóng)等等，用于控制害蟲(chóng)）和殺螨劑及殺真菌劑在茶園中都在高度密集的使用，這已經(jīng)引起了消費(fèi)者對(duì)接觸農(nóng)藥殘留造成的潛在健康風(fēng)險(xiǎn)的重視。因此，有必要提供農(nóng)殘的有效控制方法。干茶葉樣品基質(zhì)復(fù)雜，含有多種不同類別的化合物，表 1 列出了干茶葉中的主要成分。

實(shí)驗(yàn)樣品制備稱量 2 g 經(jīng)干燥和均質(zhì)化處理的茶葉到 50 mL 的塑料離心管中，加入 10 ml 蒸餾水?dāng)嚢?30 s 后，離心 30 min。向管中加入10 ml 乙腈，劇烈攪拌 1 min，然后加入 4 g 硫酸鎂和 1g 氯化鈉（Agilent Bond Elut 部件號(hào) 5982-5550），以及磷酸三苯酯（TPP）作為內(nèi)標(biāo)（ISTD）。進(jìn)一步劇烈攪拌 1 min，將離心管以 10000 rpm 的速度離心 5 min。將 1 mL 乙腈上清液轉(zhuǎn)移至 15 mL 塑料離心管中，加入 1 mL 正己烷和 5 mL 20% 的氯化鈉水溶液。將離心管劇烈搖勻 1min 后以10000 rpm 的速度離心 1 min。將正己烷上清液轉(zhuǎn)移到 2 mL 自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品瓶中，準(zhǔn)備向氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)樣。圖 1 總結(jié)了整個(gè)樣品萃取和凈化的步驟。通過(guò)使用這種簡(jiǎn)單快速的樣品制備方法，一個(gè)工作人員可以在1 個(gè)小時(shí)內(nèi)可

樣品分析氣相色譜方法對(duì)氟樂(lè)靈在 6.219 min 進(jìn)行保留時(shí)間鎖定，并使用后運(yùn)行和柱后反吹。柱后反吹能夠確保在序列的下一個(gè)運(yùn)行前快速而高效地（通過(guò)分流出口）去除上一次運(yùn)行殘留在色譜柱上的任何高沸點(diǎn)基質(zhì)。反吹 [1] 可以：• 使分析物的保留時(shí)間和響應(yīng)保持一致• 確保強(qiáng)大的色譜性能和一致的色譜峰形• 防止高沸點(diǎn)基質(zhì)污染質(zhì)譜離子源• 通過(guò)消除運(yùn)行間隙的高溫烘烤延長(zhǎng)了色譜柱壽命并縮短了循環(huán)時(shí)間色譜分析條件見(jiàn)表 2。安捷倫 7000B 三重四極桿氣相質(zhì)譜系統(tǒng)采用串聯(lián)質(zhì)譜電子電離源（EI）模式，使用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）對(duì)每個(gè)化合物的2-8 個(gè)躍遷進(jìn)行定性和定量。質(zhì)譜條件見(jiàn)表 3。表 2. 茶葉萃取液的氣相色譜分析條件色譜柱（1） 15 m × 0.25 mm，0.25 µm HP-5MSUI(19091S-431UI)色譜柱（2） 0.50 m × 0.15 mm，0.15 µm DB-5MSUI(cut from 165-6626)毛細(xì)管流裝置 帶微板流控模塊（PCM）的壓力控制三通自動(dòng)進(jìn)樣器 安捷倫 7693A 自動(dòng)液體進(jìn)樣器進(jìn)樣 2 µL 冷柱頭不分流進(jìn)樣，使用 CO2 冷卻多模式進(jìn)樣口（MMI）不分流持續(xù)時(shí)間 1 min進(jìn)樣口襯管 2 mm 內(nèi)徑帶凹槽去活襯管（5190-2296）進(jìn)樣口程序升溫 50 °C（0.1 min），600 °C/min 升至 300 °C吹掃至分流閥 50 mL/min 保持 1.0 minRTL 化合物 氟樂(lè)靈，保留時(shí)間鎖定在 6.219 min載氣 氦氣進(jìn)樣口壓力 17.460 psi 恒壓模式（運(yùn)行期間）PCM 壓力 2.0 psi 恒壓模式（運(yùn)行期間）柱箱升溫 50 °C（1.0 min），50 °C/min 升至 150 °C，6 °C/min 升至 200 °C，16 °C/min 升至 280 °C(4.07 min)后運(yùn)行時(shí)間 2.0 min后運(yùn)行溫度 280 °C后運(yùn)行壓力 進(jìn)樣口 1.0 psig，PCM 60.0 psig質(zhì)譜傳輸線溫度 280 °C

 

表 3. 茶葉中農(nóng)殘分析的質(zhì)譜條件離子源模式 El 源電子能量 –70 eV調(diào)諧 EI 自動(dòng)調(diào)諧EM 增益 10MS1 分辨率 半峰寬 1.2 amuMS2 分辨率 半峰寬 1.2 amu躍遷 見(jiàn)參考文獻(xiàn) [2]碰撞能量 見(jiàn)參考文獻(xiàn) [2]駐留時(shí)間 2-28 ms，依據(jù)每個(gè)時(shí)間窗口的躍遷數(shù)，實(shí)現(xiàn) 5 個(gè)循環(huán)/秒碰撞池氣體流量 氮?dú)?1.5 mL/min，氦氣 2.25 mL/min質(zhì)譜溫度 離子源 280 °C，四級(jí)桿1 150 °C，四級(jí)桿2 150 °C圖 2 為氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)硬件配置的示意圖。

結(jié)果和討論色譜圖QuEChERS 初次萃取液和液液萃取后的最終萃取液中咖fei因和其他共萃取物的凈化效果見(jiàn)圖 3 所示，譜圖為全掃描采集到的質(zhì)譜譜圖。

 

圖 4 顯示了氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)分析物質(zhì)響應(yīng)的穩(wěn)定性。茶葉萃取液的前 5 次進(jìn)樣運(yùn)行完畢后（當(dāng)一個(gè)新的襯管剛開(kāi)始使用時(shí)，需要穩(wěn)定分析物的響應(yīng)，這稱為氣相色譜系統(tǒng)基質(zhì)老化），對(duì) 8 種濃度為 0.1 mg/kg 的農(nóng)藥加標(biāo)茶葉萃取液連續(xù)進(jìn)樣 150 次，得到的響應(yīng)具有很高的重現(xiàn)性。這充分顯示了樣品運(yùn)行期間反吹去除色譜柱上高沸點(diǎn)基質(zhì)的有效性。

儀器校準(zhǔn)在正己烷溶劑中制備農(nóng)殘的茶葉基質(zhì)加標(biāo)溶液，濃度依次為 0.2、0.5、1、2、5、10、20、30、50、100、200 和 300 ng/mL，在茶葉樣品中的濃度分別為 0.001、0.0025、0.005、0.01、0.025、0.05、0.1、0.15、0.25、0.5、1 和 1.5 mg/kg。每個(gè)基質(zhì)加標(biāo)溶液中都含有 20 ng/mL 的 TPP 作為 ISTD（對(duì)應(yīng)于茶葉樣品為0.1 mg/kg）。 5 為 0.1 mg/kg（20 ng/mL）基質(zhì)加標(biāo)溶液的 MRM 譜圖。圖 6 分別為 0.05 mg/kg（10 ng/mL）基質(zhì)加標(biāo)溶液中早期、中期和晚期流出的分析物（分別為二氯苯腈，三唑磷，醚菌酯）的SRM 譜圖。

方法性能此報(bào)告中實(shí)驗(yàn)部分涉及的樣品制備方法和在應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)部分細(xì)化的 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析條件的優(yōu)化都經(jīng)過(guò)了 6 個(gè)綠茶和紅茶平行樣品的評(píng)估，每個(gè)加標(biāo)樣品的農(nóng)藥濃度分別為 0.01、0.1和 1 mg/kg。圖 7 為分析兩種茶葉基質(zhì)得到的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。數(shù)據(jù)表明，在兩種茶葉樣品農(nóng)藥濃度低至0.01 mg/kg 的水平上進(jìn)行定量，回收率和重復(fù)性都取得了出色的結(jié)果。樣品分析將方法推廣到 37 個(gè)樣品中進(jìn)行試點(diǎn)研究，進(jìn)一步驗(yàn)證了其性能和適用性。樣品包括綠茶和紅茶，其中還有一部分帶有香氣。測(cè)試結(jié)果如圖 8 所示。

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總體而言，81 % 的測(cè)試樣品呈陽(yáng)性（0.01 mg/kg），含有至少一種農(nóng)藥。氯氰菊酯（68%）、硫丹（41%）、克螨特（38%）、聯(lián)苯菊酯（38%）、高效氯氟氰菊酯（24%）和噻嗪酮（24%）是最常見(jiàn)的農(nóng)藥。一些樣品包含接近 EU MRL 水平的農(nóng)藥，甚至還發(fā)現(xiàn)在一個(gè)樣品中有兩種農(nóng)藥（噻嗪酮和三唑磷）都超過(guò)了 EUMRL 水平。綠茶的陽(yáng)性率比紅茶高，帶有香味的綠茶農(nóng)藥檢出率更高，這可能是因?yàn)榫秃突ò耆菀讓⒏嗟霓r(nóng)藥引入到茶葉中。這表明，為了減少消費(fèi)者的膳食暴露，茶葉作為一種食品類商品的代表，需要開(kāi)展更頻繁的農(nóng)殘監(jiān)測(cè)。

 

結(jié)論在干茶葉中對(duì)農(nóng)殘的測(cè)定極富挑戰(zhàn)性。干茶葉基質(zhì)很復(fù)雜，所以在進(jìn)行多農(nóng)殘分析時(shí)無(wú)論是在樣品處理還是在色譜/質(zhì)譜分析上都具有一定的挑戰(zhàn)性。研究開(kāi)發(fā)了一種新型萃取和快速凈化方法，用于分析茶葉樣品中的農(nóng)藥殘留。此項(xiàng)萃取和凈化技術(shù)以 QuEChERS 方法為基礎(chǔ)，先用乙腈萃取，之后輔予液液萃取。這種樣品處理方法顯著降低了終端萃取液中咖啡yin（茶葉中一種天然成分）和其他半揮發(fā)共萃取物的含量。終端萃取液中咖啡yin的降低能夠提高保留時(shí)間的重復(fù)性和那些與咖啡yin共流出或在其之后出峰的組分的檢出限。為了縮短色譜循環(huán)周期、消除高沸點(diǎn)組分殘留并減少離子源的污染，可使用微板流控技術(shù)對(duì)色譜柱進(jìn)行后運(yùn)行和柱后反吹的操作。對(duì)大多數(shù)被分析物，方法的性能指標(biāo)能夠滿足 SANCO/12495/2011文件 [3] 的要求，回收率在可接受的 70%-120% 范圍內(nèi)，三個(gè)加標(biāo)濃度的重復(fù)性都滿足 20% 的要求（0.01、0.1 和1 mg/kg）。對(duì)少數(shù)被分析物（如醚菌酯和六氯苯）來(lái)說(shuō)，回收率較低，范圍在50% 到 70%。因?yàn)檫@些化合物的測(cè)定比較一致（20% RSD），可以通過(guò)已知的回收率系數(shù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正。在靈敏度方面，大多數(shù)被分析物可以在 0.001-0.005 mg/kg （相當(dāng)于 0.2-1 ng/mL）的范圍內(nèi)定量，多數(shù)情況下，EU MRL 遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于這個(gè)范圍，這就使得在 EU MRL 水平上對(duì)這些目標(biāo)物進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量成為可能?？偠灾?，優(yōu)化了的樣品制備步驟和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析條件賦予方法的性能和指標(biāo)可確保在歐盟立法設(shè)定的 MRL 水