前言海洋生物毒素是海洋植物藻類產(chǎn)生的次生代謝物，其濃度一般很低。在藻類生長時，毒素的濃度可以達(dá)到有毒水平，特別是雙殼類軟體動物中毒素的積累。在過去的二十年中，有害藻類大量繁殖，其數(shù)量和強(qiáng)度都日益增加，大量的有毒化合物在海洋食物鏈中被發(fā)現(xiàn) [海洋生物毒素。糧農(nóng)組織食品和營養(yǎng)文件（80）2004]。由于歐盟現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)方法中，小白鼠生物法的高變異性、低檢測能力和有限的特異性，歐洲食品安全局（EFSA）要求需要開發(fā)出更靈敏、更可靠的

您面對的挑戰(zhàn)目前的挑戰(zhàn)是需要尋找靈敏和可靠的分析方法用于海產(chǎn)品中親脂性的海洋毒素的測定，這些海洋毒素包括大田軟海綿酸（OA）、鰭藻毒素（DSP 毒素）、聚醚類毒素（如原多甲藻酸、蛤毒素和蝦夷扇貝毒素）。這種方法應(yīng)該能夠擴(kuò)展到親脂毒素（如軟骨藻酸、環(huán)亞胺毒素或螺旋內(nèi)酯毒素）的進(jìn)一步檢測。歐盟立法規(guī)定檢測限（LOD）應(yīng)該低于原多甲藻酸、大田軟海綿酸和鰭藻毒素和蛤毒素的總和以及蝦夷扇貝毒素的最大殘留（MRL）。基質(zhì)使得痕量毒素的定量和確認(rèn)分析更加復(fù)雜。由于很多標(biāo)準(zhǔn)品很難得到，所以只能根據(jù)其它的毒素進(jìn)行定量分析。

我們的綜合方法當(dāng)前，海洋生物毒素的分析方法主要是基于物理化學(xué)技術(shù)，如液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜。三重四極桿質(zhì)譜能大幅減少或消除基質(zhì)的干擾。多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）是根據(jù)待測物的母離子在碰撞反應(yīng)池產(chǎn)生特征離子，然后采集這些特征離子來完成檢測。而且，待測物母離子（MS1 設(shè)置成選擇離子掃描模式）與單四極桿質(zhì)譜的選擇離子掃描的選擇性相同，生成的子離子（MS2 的選擇離子掃描模式）更有可能成為目標(biāo)化合物的特征離子，這樣的模式能夠大大提高M(jìn)RM 的選擇性。特征的子離子組合（更高的選擇性）和背景噪音的消除使得即使在復(fù)雜基質(zhì)樣品中也能得到更低的檢測限。本文的方法中，使用安捷倫 6460 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀和多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）、安捷倫 1200 SL 快速高分離液相色譜以及MassHunter 工作站軟件，建立了貝類樣品中親脂性海洋生物毒素的高靈敏度和高選擇性的分析方法。本文介紹的樣品凈化方法非常簡單，因此很適合常規(guī)檢測。它可以用于 OA、DTX-1、DTX-2 的分析，包括水解后的脂、YTX、OH-YTX、PTX-1、PTX-2、AZA-1、AZA-2 和 AZA-3。由于缺少某些商品化的毒素標(biāo)樣，因此使用 CopyCalibrationLevel.quant.script 對其它的毒素化合物進(jìn)行定量分析。

方法和運(yùn)行用于海洋生物毒素的現(xiàn)代分析方法是基于三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)的技術(shù)。樣品前處理很簡單，只需要用溶液提取，然后過濾。液相色譜進(jìn)行毒素的分離，然后用液相色譜-電噴霧離子源-串聯(lián)質(zhì)譜（MRM正/負(fù)模式）進(jìn)行待測物的定量分析。分析步驟液相萃取高效液相色譜，線性梯度進(jìn)行分離液相色譜-電噴霧離子源-串聯(lián)質(zhì)譜（MRM）用于毒素檢測樣品制備步驟稱取 2 g 熟的研磨貝類。加入 9 mL 甲醇溶液（80%）。進(jìn)行兩次提取步驟。將兩次提取液混合在一起，移至 50 mL 容量瓶。取一定體積的樣品溶液，過濾（RC 0.45 µm），10 µL 樣品進(jìn)到液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析。

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法親脂性海洋生物毒素的總分析時間小于30 min。分析方法中，對于 OA、DTX-1、DTX-2、PTX-1、PTX-2、AZA-1、AZA-2和 AZA-3 采用正離子模式。YTX 需要用不同的色譜柱和流動相另外進(jìn)行分析。提取物（10 µL）直接進(jìn)到液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行分析。對于液相色譜方法，正離子模式下用 0.1% 甲酸溶液（A）和甲醇（B）；對于負(fù)離子模式下用 2 mM醋酸銨溶液（A）和甲醇（B）。色譜柱（Phenomenex Luna 5 pm C18（2） 100 ?150 x 2.0 mm [正離子模式]，ZORBAXEclipse Plus C 8 4.6 x 75 mm 3.5 pm [負(fù)離子模式]），柱溫為30 °C，流速為0.2 mL/min。

結(jié)論通過國際合作研究進(jìn)行方法驗(yàn)證。合作研究是在 §64 LFGB 工作小組的“藻類毒素"框架下進(jìn)行的，由聯(lián)邦消費(fèi)者保護(hù)和食品安全（BVL)辦公室主辦。