引言由于沒(méi)有一種柱子可以適用于所有分析，所以人們一直在研究新的HPLC液相色譜柱技術(shù)?？茖W(xué)家們一直都在尋找有助于創(chuàng)新、提高效率，并更快獲得良好結(jié)果的更好、更快的方法。例如，在制藥行業(yè)，藥物的研究和開(kāi)發(fā)需要更高效的色譜柱，以增加在一定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確分析的數(shù)量。更快地篩選出潛在的藥物非常有意義。另外，政府和行業(yè)規(guī)范對(duì)儀器和技術(shù)的要求也越來(lái)越嚴(yán)格。用于食品的來(lái)自空氣和水（水，空氣和食品中）的每一種物質(zhì)都要嚴(yán)格檢查其質(zhì)量和安全性。高質(zhì)量HPLC柱是耐用的儀器和方法的必要組成部分，有了所有這些，才能獲得可靠的結(jié)果。ZORBAX Eclipse Plus C8 柱有幾種填料粒徑和柱尺寸，是提高效率的良好工具。它們分離酸性、中性和堿性化合物都有良好的峰形。是方法開(kāi)發(fā)的色譜柱。

Eclipse Plus C8的選擇性色譜柱的選擇要考慮到一些因素。選擇性是進(jìn)行色譜柱選擇最重要的因素之一。選擇性系數(shù)(α)是兩個(gè)峰的相對(duì)保留值：α = k2 / k1在這里 k2 和 k1 分別是第二個(gè)洗脫出來(lái)的峰和第一峰的保留因子，也稱容量因子。如果這兩個(gè)峰一起被洗脫，α 為 1 ；對(duì)這兩個(gè)緊密相鄰的峰來(lái)說(shuō)，選擇性接近１。選擇性，或峰間距，可以通過(guò)改變溫度、流動(dòng)相或固定相（色譜柱）進(jìn)行調(diào)節(jié)。因?yàn)檫x擇性體現(xiàn)了分析物與固定相/流動(dòng)相之間的相互作用，所以難以理解、也很難預(yù)測(cè)，常常需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化。有各種柱子可供選擇，這是改變?chǔ)恋挠辛Χ菀椎霓k法，尤其是因穩(wěn)定性、溶解度、pH 或其它局限無(wú)法改變流動(dòng)相時(shí)。圖1顯示了在同樣的色譜條件下，EclipsePlus C8柱、Eclipse Plus C18 柱，和 Eclipse XDBC8 柱的不同選擇性。Eclipse Plus C8 柱與 EclipseXDB-C8 柱相比，雖然對(duì)三種非常難分離的化合物來(lái)說(shuō)，α僅改變了6%，但分離度增加了1倍，從1.23增至2.42。

?

這些柱子都有相似之處，如，同樣以ZORBAX硅膠為基質(zhì)，都采用的是安捷倫控制的生產(chǎn)技術(shù)，因此，可以預(yù)計(jì)其洗脫順序也比較相似，如圖所示。但它們之間也有明顯的不同，例如，Eclipse Plus柱和Eclipse XDB柱采用的硅膠處理和鍵合技術(shù)不同，C18和C8的官能團(tuán)也不同。這些差異反映為選擇性的不同，進(jìn)而將改善分離度。對(duì)于a接近1的緊密相鄰峰，a的微小變化將對(duì)分離度產(chǎn)生極大的影響，例如在這個(gè)例子中，a 從 1.07變?yōu)?.14，分離度就從1.15增加到2.42。

快速分離(RR)小粒徑的填料與大粒徑填料相比，優(yōu)勢(shì)就是有更高的柱效。用這一特點(diǎn)可以明顯提高效率。填充了小粒徑填料的較短色譜柱，在保持了用長(zhǎng)柱能得到的足夠分離度的同時(shí)，顯著加快了分析速度。圖3、4、5是應(yīng)用實(shí)例，用更短的高分離度快速(RR) (4.6 x 50 mm,3.5 µm)柱代替Eclipse Plus C8分析柱(4.6 x 150 mm,5 µm)。直接或“plug & play"替代都在保持足夠分離

度的同時(shí)，明顯縮短了分析時(shí)間，分析時(shí)間與柱長(zhǎng)成正比。小粒徑填料柱還明顯提高了靈敏度。表1 列出了這三個(gè)例子中分析柱和 RR 柱分離時(shí)最后洗脫峰的峰高、峰面積和變化的百分比。由于進(jìn)樣量相等，用兩個(gè)柱子得到的峰面積都相同，但是RR柱的峰高（靈敏度測(cè)量[信噪比]）卻要高 50%。三張圖中還列出了這些例子的系統(tǒng)反壓。RR柱因較小粒徑(3.5 vs. 5 µ)造成的高反壓?jiǎn)栴}，通過(guò)更短的柱長(zhǎng)(50 vs. 150 mm)得到了彌補(bǔ)。分析柱(150 mm)和 50-mm RR 柱的反壓相等，證實(shí)了安捷倫RR柱的plug & play能力。所有的壓力都在安捷倫1100和1200系列液相色譜儀的操作范圍內(nèi)。如果需要，還可以選擇較高的流速，進(jìn)行更快的分析。Eclipse Plus C8柱有1.8、3.5和5 µm三種粒徑，適用于分析、高分離度快速和快速 LC 分析。表 2 列出了可供選擇的各種配置。

堿性化合物的出色峰形Eclipse Plus柱（C8和C18）的顯著的特點(diǎn)是分離各種類型樣品：酸性、堿性和中性樣品，都能得到出色的峰形。在上述例子的各圖中都列出了用美國(guó)藥典拖尾因子計(jì)算表示的峰形。每個(gè)例子中，都接近于理想狀態(tài)(1.0)。高性能+峰形，柱效和分離度+均歸功于全程嚴(yán)格控制的、改進(jìn)的硅膠生產(chǎn)和鍵合技術(shù)。堿性化合物（特別是含氨基的分子）的高效反相色譜分離經(jīng)常很困難。在低pH條件下(pH ＜ 3)，堿發(fā)生質(zhì)子化(BH+)，因而水溶性很強(qiáng)，保留較差。在pH 7時(shí)，某些氨基可能仍然質(zhì)子化，而其它的則失去其質(zhì)子(B)。硅膠上沒(méi)有反應(yīng)硅醇基呈離子型(SiO-)，將與質(zhì)子化的離子樣品發(fā)生相互作用。這種離子交換二級(jí)反應(yīng)將導(dǎo)致峰拖尾。在低 pH 條件下，硅醇基未離子化(SiOH)，與堿性分析物不發(fā)生相互作用。圖６顯示了在pH 7時(shí)，同樣條件下分析２個(gè)堿性化合物的實(shí)例。這兩個(gè)已知化合物，阿密曲替林和右美沙芬，由于在中性 pH 條件下部分離子化，在 B 和 BH+之間互相轉(zhuǎn)化，用其它柱子分離時(shí)拖尾非常嚴(yán)重。但使用Eclipse Plus C8后，峰形非常好。Eclipse Plus進(jìn)行了ZORBAX硅膠處理、封端和鍵合，降低了離子化硅醇基的相互作用，顯著改善了峰形。