前言牛磺酸是一種含硫氨基酸，廣泛分布于體內(nèi)各個組織和器官，且主要以游離狀態(tài)存在于組織間液和細(xì)胞內(nèi)液中，最先于公牛膽汁中發(fā)現(xiàn)而得名。長期以來一直被認(rèn)為是含硫氨基酸的無功能代謝產(chǎn)物，后來經(jīng)諸多研究發(fā)現(xiàn)，牛磺酸是調(diào)節(jié)機體正常生理活動的活性物質(zhì)，且具有多種功能，是人體必需的重要氨基酸。人乳中?；撬岷亢芨?，是主要的游離型氨基酸，而牛乳中?；撬岷繀s非常少。因此，?；撬嵋驯蛔鳛闋I養(yǎng)強化劑添加在奶粉及其他各類兒童營養(yǎng)食品中，可以促進嬰幼兒腦組織和智力的發(fā)育、提高新陳代謝能力，對寶寶的健康發(fā)展起著至關(guān)重要的作用。我國食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，推薦嬰兒配方食品中添加?；撬醄1]。?；撬岬臋z測方法有很多，目前常用的方法是柱前或柱后衍生化高效液相色譜法。例如現(xiàn)行國標(biāo)就是使用鄰苯二甲醛(ortho-phthalaldehyde, OPA) 柱后衍生以及單磺酰氯柱前衍生法[2]。柱后衍生法利用?；撬崤c OPA 在堿性條件下生成相應(yīng)的衍生物，通過用熒光檢測器來測定衍生物的含量，該法具有方法穩(wěn)定、干擾小、重現(xiàn)性較好及回收率較高等優(yōu)點，但是柱后衍生需要使用離子交換柱，離子交換柱通用性不好，不同供應(yīng)商色譜柱一致性很差，安裝了柱后衍生裝置的液相色譜儀器通用性也很差，且裝置較為昂貴，所以具有很大的局限性。柱前衍生方法利用單磺酰氯在堿性條件下與?；撬徇M行衍生化反應(yīng)，在紫外或熒光條件下測定?；撬岬暮?，該法需要人工進行復(fù)雜且要求苛刻的衍生操作（衍生劑必須每次臨用前現(xiàn)配、衍生過程需要避光等），衍生需要的時間很長而且衍生物不穩(wěn)定，需衍生后立即進樣分析，方法的檢測靈敏度也較低。早期也有使用靈敏度更高、且衍生反應(yīng)快速的 OPA 作為衍生劑的手動柱前衍生的方法[3-4]，但因衍生產(chǎn)物的半衰期比丹磺酰氯的短很多，手動衍生因無法嚴(yán)格控制衍生時間的長短而重現(xiàn)性很差，

所以方法的局限性更大。安捷倫全自動氨基酸分析方法[5] 使用 OPA 作為衍生劑在自動進樣器內(nèi)完成全自動衍生，既克服了 OPA 作為柱前衍生劑的缺點，又保留了 OPA 衍生劑的優(yōu)點，極大地提高了方法的穩(wěn)定性及可靠性。安捷倫公司北京實驗室及一些用戶[6] 借助標(biāo)準(zhǔn)的安捷倫全自動氨基酸分析方法[7] 及試劑包并對其進行簡化、利用單磺酰氯衍生方案的樣品前處理步驟及色譜分析條件，完成了對?；撬岬姆治觥ｋS著安捷倫公司對全自動氨基酸分析方法的改進[8] 及新色譜柱的出現(xiàn)，對?；撬岱治龇椒ǖ男阅苡辛诉M一步提高的空間，也需要分析速度更快、靈敏度更高且更合理的?；撬岱治龇椒?。本研究采用的牛磺酸測定方法是在安捷倫全自動氨基酸分析方法[8]及試劑的基礎(chǔ)上，結(jié)合 OPA 分析?；撬岬奈墨I[3-4] 對方法進行了易用性及合理性的改善。同時，靈敏度的提高使之僅用紫外檢測器就可檢出未強化奶粉中牛磺酸的本底含量。

實驗部分試劑和樣品乙腈（迪馬公司）為色譜純；醋酸銨 (Sigma)、5-磺基水楊酸(CNW) 為優(yōu)級純。所用的實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水；牛磺酸對照品及所有樣品均來自安捷倫的客戶。衍生試劑選用安捷倫氨基酸分析套件中的硼酸緩沖鹽（部件號5061-3339）及 OPA（部件號 5061-3335，這是已經(jīng)與 3-巰基丙酸混合并溶于 0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液中、配制好的 OPA）。 

儀器和設(shè)備采用 Agilent 1220 Infinity 液相色譜儀系統(tǒng)（部件號 G4294B），配備：二元梯度泵（內(nèi)置脫氣機）、自動進樣器、柱溫箱及 DAD檢測器?？刂萍皵?shù)據(jù)處理軟件使用 OpenLab Chemstation，版本C.01.10。色譜柱選用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 4.6 × 50 mm,2.7 μm（部件號 699975-902）。標(biāo)樣配制準(zhǔn)確稱取 0.1000 g 牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解并定容至 100 mL，得到 1 mg/mL ?；撬針?biāo)準(zhǔn)儲備液。將該?；撬針?biāo)準(zhǔn)儲備溶液用水稀釋配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為 0.5、2.0、5.0、10.0及 20.0 μg/mL，臨用前現(xiàn)配。

樣品前處理配制 0.2 mol/L 磺基水楊酸溶液：稱約 5 g 的 5-磺基水楊酸（帶 2分子水）溶于 100 mL 水中。配制及處理樣品：稱取約 5 g 奶粉溶于 40 mL 熱水（約 40 °C）中，充分搖動混勻后靜置。將該奶粉溶液與 0.2 mol/L 磺基水楊酸溶液 1:1 充分混合（各 5 mL）后靜置 10 分鐘，靜置后置于高速離心機，13000 轉(zhuǎn)離心 5 分鐘。取上清液用 0.2 μm 過濾膜（水溶性）過濾后使用。加標(biāo)樣品配制前加標(biāo)樣品：溶解奶粉之前，加入 20 μg/mL 標(biāo)樣 5 mL，剩下步驟與處理樣品一致。相當(dāng)于在樣品中添加了 1.25 μg/mL 的?；撬?。后加標(biāo)樣品：處理好并過濾后的樣品溶液與 20 μg/mL 標(biāo)樣等體積混合。相當(dāng)于樣品的?；撬釢舛葴p半，再加上 10 μg/mL 的?；撬?。