前言根據(jù) GB/T 4927 的規(guī)定，啤酒是以麥芽、水為主要原料，加啤酒花，經(jīng)酵母發(fā)酵釀制而成的酒類(lèi)制品。成品啤酒由豐富的物質(zhì)組成，包含酯類(lèi)、醇類(lèi)、酚類(lèi)、氨基酸等，其中酚類(lèi)化合物在啤酒中扮演重要角色。特定而言，在生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯藏、使用等階段，酚類(lèi)物質(zhì)可能與含氯的水、容器和空氣等接觸，發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成具有特殊味道的氯苯酚類(lèi)物質(zhì)，使啤酒產(chǎn)生消毒水、臭味等味道，導(dǎo)致啤酒口感變化；同時(shí)，氯苯酚類(lèi)物質(zhì)本身也具有一定的毒性，對(duì)人體有致癌性、致畸性[1]。因此，全流程密切監(jiān)測(cè)啤酒中的氯苯酚類(lèi)化合物對(duì)于保證啤酒的品質(zhì)和安全性至關(guān)重要。氯苯酚類(lèi)化合物是一類(lèi)含氯的苯酚衍生物，根據(jù)氯元素在苯環(huán)上的位置、取代數(shù)量等的不同，包括多達(dá)十幾種化合物。通常檢測(cè)的幾種含氯苯酚化合物包括鄰氯苯酚、2,4-二氯苯酚、2,6-二氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚和 2,3,4,6-四氯苯酚，可用分析方法主要有液相色譜法[2,3] 和液質(zhì)聯(lián)用方法、氣相色譜法和氣質(zhì)聯(lián)用方法。由于氯苯酚類(lèi)化合物極性大、難電離，采用氣相色譜和氣質(zhì)聯(lián)用方法進(jìn)行分析時(shí)，一般需要在樣品前處理中對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行衍生，分析難度較高。

液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用方法是目前針對(duì)氯苯酚類(lèi)化合物的主要分析技術(shù)，有利于簡(jiǎn)化樣品前處理過(guò)程，提升分析效率，并實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定性和定量。關(guān)于液相色譜法測(cè)定啤酒中的上述五種氯苯酚類(lèi)化合物，暫未查到相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。但用于測(cè)定氯苯酚類(lèi)化合物的液相色譜方法一般采用傳統(tǒng)的高效液相色法 (HPLC)，分離效率和分離能力較低，不利于快速分析。本文采用 Agilent 1290 II UHPLC 結(jié)合 Poroshell 120Bonus-RP 色譜柱，開(kāi)發(fā)出一種針對(duì)五種氯苯酚類(lèi)化合物的快速分析方法，可準(zhǔn)確分離啤酒中的五種氯苯酚類(lèi)化合物。經(jīng)過(guò)初步方法學(xué)驗(yàn)證，該方法適用于準(zhǔn)確測(cè)定啤酒中的五種氯苯酚類(lèi)物質(zhì)。

實(shí)驗(yàn)部分試劑和樣品甲醇、磷酸為色譜純，購(gòu)于迪馬公司；所用實(shí)驗(yàn)用水為 MilliporeMilli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水；鄰氯苯酚、2,4-二氯苯酚、2,6-二氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚和 2,3,4,6-四氯苯酚購(gòu)于阿拉丁；樣品為市售產(chǎn)品。

儀器和設(shè)備采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng) ，配備如下安捷倫模塊：四元泵（部件號(hào) G7104A）、自動(dòng)進(jìn)樣器（部件號(hào) G7167B）、柱溫箱（部件號(hào) G7116B）和二極管陣列檢測(cè)器（部件號(hào) G7117A）。色譜柱選用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 Bonus-RP（4.6 × 100 mm, 2.7 μm；部件號(hào) 695968-901）。標(biāo)準(zhǔn)品制備標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液：精密稱(chēng)取鄰氯苯酚、2,4-二氯苯酚、2,6-二氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚、2,3,4,6-四氯苯酚各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量，置于容量瓶中，加甲醇適量，超聲使其溶解，然后用甲醇定容至刻度，制得 2000 μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液：取標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液適量，加 50% 甲醇，逐級(jí)稀釋制得 4 μg/mL、8 μg/mL、16 μg/mL、32 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL 和 160 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液。

樣品前處理取啤酒，打開(kāi)蓋子，緩慢從瓶中傾出部分啤酒至干凈的 40 mL 頂空瓶中；輕輕晃動(dòng)，緩慢除去大量氣體；然后將頂空瓶置至超聲儀中，超聲脫氣約 1 min；取脫氣后的啤酒，過(guò) 0.22 μm 微孔濾膜后上機(jī)分析

結(jié)果與討論五種氯苯酚類(lèi)物質(zhì)分離結(jié)果按照上述實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)樣分析空白試劑（50% 甲醇-水）、五種氯苯酚類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液（濃度為 40 μg/mL）和三種啤酒樣品溶液，所得五種氯苯酚類(lèi)化合物的分離結(jié)果如圖 1 所示。從圖中可以看出，空白試劑在氯苯酚類(lèi)各物質(zhì)色譜峰對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)干擾；在標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中，氯苯酚類(lèi)各物質(zhì)色譜峰分離良好；在啤酒樣品中，未檢出氯苯酚類(lèi)各物質(zhì)的色譜峰，且無(wú)其他成分干擾。

方法檢出限根據(jù) S/N = 3 計(jì)算方法檢超出限 (LOD)。由于鄰氯苯酚和 2,6-二氯苯酚的檢測(cè)波長(zhǎng)為 276 nm，而 2,4-二氯苯酚、2,4,6-三氯苯酚和 2,3,4,6-四氯苯酚的檢測(cè)波長(zhǎng)為 290 nm，因此分別取這兩個(gè)波長(zhǎng)下的噪音來(lái)計(jì)算各目標(biāo)化合物的 LOD。結(jié)果表明，在 1 μL 進(jìn)樣量、檢測(cè)波長(zhǎng)276 nm 下，鄰氯苯酚的 LOD 為 0.196 μg/mL，2,6-二氯苯酚的 LOD 為 0.336 μg/mL；在 1 μL 進(jìn)樣量、檢測(cè)波長(zhǎng) 290 nm 下，2,4-二氯苯酚的 LOD 為 0.121 μg/mL，2,4,6-三氯苯酚的 LOD 為 0.0923 μg/mL，2,3,4,6-四氯苯酚的 LOD 為 0.107 μg/mL。如果分析人員在實(shí)際應(yīng)用中需要獲得更低的方法檢出限，可以采用增加進(jìn)樣量和換用 60 mm 流通池等措施。

氯苯酚類(lèi)物質(zhì)的純度1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)配置二極管陣列檢測(cè)器，可以對(duì)色譜峰進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，并進(jìn)行純度分析。由于在分析的啤酒樣品中未檢出五種氯酚類(lèi)物質(zhì)，因此采用加標(biāo)樣品進(jìn)行純度判定。向啤酒樣品中添加 5 μg/mL 各氯苯酚類(lèi)物質(zhì)，然后進(jìn)樣分析，進(jìn)行純度分析處理。結(jié)果列于表 3 中。從表中可以看出，四種啤酒加標(biāo)樣品中的五種氯苯酚類(lèi)物質(zhì)色譜峰純度良好，純度因子均大于0.999，提示各分析物的色譜峰均未受到干擾。

結(jié)論本文建立了啤酒中五種氯苯酚類(lèi)物質(zhì)的快速分析方法。該方法使五種氯苯酚類(lèi)物質(zhì)獲得了良好的分離度，初步方法學(xué)考察結(jié)果（包括分離度、靈敏度、回收率和重復(fù)性等指標(biāo)）表明，該方法符合液相色譜定性和定量分析的要求。該方法采用 Poroshell 120 核殼工藝色譜柱，可以在較低的柱壓下獲得較高的柱效，同時(shí)實(shí)現(xiàn)快速分離。該色譜柱與同規(guī)格、相同鍵合相的全多孔亞 2 μm 色譜柱相比，柱效達(dá)到亞 2 μm 柱的90%，但是柱壓僅為亞 2 μm 柱的 40%–50%。因此，借助該色譜柱，該方法可實(shí)現(xiàn)低壓、快速分離，在 10 min 內(nèi)即可完成對(duì)五種氯苯酚類(lèi)物質(zhì)的分析。由于氯苯酚類(lèi)物質(zhì)具有防腐、殺菌、殺蟲(chóng)、防霉作用，因此在環(huán)境、紡織、印染、家具等行業(yè)也有廣泛應(yīng)用，且由于其對(duì)人體的毒性而受到嚴(yán)格監(jiān)管。在排除干擾物質(zhì)的前提下，本文所述的方法也有望作為這些行業(yè)中監(jiān)測(cè)氯苯酚類(lèi)化合物的參考方法。