肽譜分析是表征生物治療蛋白質(zhì)*的工具，該方法廣泛運(yùn)用于生物藥物 蛋白質(zhì)的生產(chǎn)過程，以確保產(chǎn)品在各生產(chǎn)階段的完整性和穩(wěn)定性。利用安捷倫LC/MS 進(jìn)行肽譜分析是表征肽段修飾的技術(shù)。穩(wěn)定且重現(xiàn)性高的 LC/MS 方法， 是成功實(shí)現(xiàn)肽譜分析分離的關(guān)鍵。因此，需要對 LC/MS 分離參數(shù)進(jìn)行全面的 研究。

分析復(fù)雜蛋白質(zhì)酶解物的過程中，如何實(shí)現(xiàn)肽段的、高分離度分離是一項(xiàng) 巨大的挑戰(zhàn)。甲酸是一種兼容質(zhì)譜的離子對試劑，常用于 LC/MS 方法中，可實(shí) 現(xiàn)靈敏檢測。然而，甲酸也會(huì)導(dǎo)致峰形展寬，從而使肽段發(fā)生共洗脫1 。除此之 外，流動(dòng)相含甲酸的現(xiàn)有 LC/MS 方法具有峰容量小、峰展寬以及對相似肽段分 離度差的限制。選擇正確的反相色譜柱和 LC/MS 方法，對肽譜分離的成功十分 重要。

Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色譜柱專為的肽段分離而設(shè)計(jì)。HPH Poroshell 填料包覆了一層帶正電荷的改性表面基團(tuán)。采用 C18 配基的表面多孔 顆粒填料表面帶電，可改善峰形并提高峰容量?？讖?(120 Å) 和粒徑 (2.7 µm) 能夠以低色譜柱反壓提供類似 UHPLC 的性能。AdvanceBio Peptide Plus 色譜 柱還可以與含甲酸的流動(dòng)相兼容，在與質(zhì)譜聯(lián)用時(shí)可提供出色的峰形。

本應(yīng)用簡報(bào)展示了 AdvanceBio Peptide Plus 色譜柱在用含甲酸的流動(dòng)相對單克 隆抗體 (mAb) 進(jìn)行肽譜分離時(shí)顯示出的性能。本文通過研究流速、梯度時(shí) 間和溫度等不同的填料影響因素，開發(fā)出了實(shí)現(xiàn)肽段分離的 LC/MS 方法。 并對峰容量、峰寬、峰面積、峰高、重現(xiàn)性和序列覆蓋率等肽譜分析的關(guān)鍵要 素進(jìn)行了評價(jià)。