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真核表達(dá)系統(tǒng)的出現(xiàn)客服了傳統(tǒng)原核表達(dá)系統(tǒng)諸多缺陷

2020-10-24  閱讀(1120)

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   原核表達(dá)系統(tǒng)是一個(gè)成熟的系統(tǒng),常用于研究基因功能。由于原核表達(dá)系統(tǒng)存在包涵體蛋白純化困難、蛋白修飾不*等缺陷,人們開始利用真核表達(dá)系統(tǒng)來研究基因。
  在各種表達(dá)系統(tǒng)中,首先采用原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行研究,這也是目前成熟的表達(dá)系統(tǒng)。該技術(shù)的主要方法是將已克隆到目的基因DNA的片段的載體(通常為質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化到細(xì)菌(通常為大腸桿菌)中,通過IPTG誘導(dǎo)和終純化獲得所需的目的蛋白。其優(yōu)點(diǎn)是可以在短時(shí)間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物,所需成本相對(duì)較低。
  但與此同時(shí),原核表達(dá)系統(tǒng)仍有許多不可克服的缺點(diǎn):如常用的表達(dá)系統(tǒng)不能調(diào)節(jié)表達(dá)時(shí)間和表達(dá)水平,某些基因的連續(xù)表達(dá)可能對(duì)宿主細(xì)胞造成毒性作用,過度表達(dá)可能導(dǎo)致非生理反應(yīng),靶蛋白往往以包涵體的形式表達(dá),導(dǎo)致產(chǎn)物純化困難;而且,原核表達(dá)系統(tǒng)的翻譯后修飾系統(tǒng)并不完善,表達(dá)產(chǎn)物的生物活性較低。為了克服上述缺點(diǎn),許多學(xué)者將原核基因調(diào)控系統(tǒng)引入真核基因調(diào)控領(lǐng)域。它的優(yōu)點(diǎn)是:
  1.根據(jù)原核生物蛋白與靶基因相互作用的高度特異性設(shè)計(jì),靶基因與真核基因調(diào)控序列基本沒有同源性,因此不存在基因的非特異性激活或抑制
  2.能誘導(dǎo)高效基因表達(dá),高達(dá)105倍,超越其他系統(tǒng);
  3.它可以嚴(yán)格控制基因表達(dá),即既可以控制基因表達(dá)的“開關(guān)”,又可以人為控制基因表達(dá)量
  因此,利用真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)目的蛋白越來越受到重視。目前,基因工程研究中常用的真核表達(dá)系統(tǒng)包括酵母表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。
  1.根本的區(qū)別是,原核表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)系統(tǒng)是原核細(xì)胞;真核表達(dá)系統(tǒng)在真核細(xì)胞如酵母細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)。
  2.兩種表達(dá)系統(tǒng)都通過含有原核或真核啟動(dòng)子和其他表達(dá)相關(guān)元件的質(zhì)粒系統(tǒng)表達(dá)外源基因。
  3.與真核表達(dá)系統(tǒng)相比,原核表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)效率易于優(yōu)化和調(diào)整,表達(dá)量高。然而,當(dāng)用于表達(dá)真核外源基因時(shí),由于不同的蛋白質(zhì)折疊和糖鏈修飾,其應(yīng)用受到限制。真核表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)量相對(duì)較低。雖然酵母和昆蟲系統(tǒng)的表達(dá)量相對(duì)較高,但哺乳動(dòng)物基因的表達(dá)也存在不足。

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