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白細胞介素現(xiàn)在是指一類分子結(jié)構(gòu)和生物學功能已基本明確,具有重要調(diào)節(jié)作用而統(tǒng)一命名的細胞因子。白細胞介素在傳遞信息,激活與調(diào)節(jié)免疫細胞,介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用。重組人白細胞介素2是由多細胞來源,又具有多向性作用的細胞因子;對機體的免疫應答和抗病毒感染等有重要作用。其主要作用為:刺激免疫系統(tǒng)活性,促進免疫細胞增殖。刺激自然殺傷細胞的增殖與活化、并增強其活性;誘導細胞毒性淋巴細胞,增強其溶細胞活性;誘導淋巴因子活化殺傷細胞,此細胞具有廣譜的抗腫瘤活性,可以溶解多種腫瘤細
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真核表達細胞的優(yōu)點:重組DNA易轉(zhuǎn)染,遺傳穩(wěn)定,可重復;識別和去除內(nèi)含子;進行翻譯后修飾;磷酸化、糖基化、二硫鍵、寡聚體等的形成、高級結(jié)構(gòu)的正確折疊;產(chǎn)品的構(gòu)型正確率高,可被改造成類人體源性,免疫源性好;可分泌至培養(yǎng)基,提純工藝簡單,成本低;可用于基因治療。細胞表達系統(tǒng)能誘導高效表達,對表達的蛋白進行正確折疊,并進行復雜糖基化修飾,蛋白活性接近于天然蛋白,不需去除內(nèi)毒素,周期較長,操作復雜,需要細胞房,無菌,成本投入高。真核表達細胞載體趨向于既有利于擴增目的基因又有利于篩選陽性克隆的載體的構(gòu)建。
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哺乳動物細胞真核表達系統(tǒng)的瞬時表達是通過轉(zhuǎn)染試劑完成的
哺乳動物細胞真核表達系統(tǒng)能表達天然結(jié)構(gòu)完整的重組蛋白,是廣泛應用的人類復雜糖基化蛋白的表達系統(tǒng),生物活性接近于天然蛋白質(zhì),是活性蛋白因子及各類受體蛋白的表達系統(tǒng),在生物制藥領域應用較廣,60%以上的的藥用蛋白產(chǎn)品由哺乳動物細胞表達系統(tǒng)獲得。哺乳動物細胞瞬時轉(zhuǎn)染能在短期內(nèi)快速表達高活性蛋白,滿足蛋白制備的需求。哺乳動物細胞真核表達系統(tǒng)是通過脂質(zhì)體或者是PEI的等轉(zhuǎn)染試劑在體外通過和質(zhì)粒形成復合體,將質(zhì)粒導入細胞后進行瞬時表達。稱為瞬時表達的原因是因為質(zhì)粒在真核細胞中不能擴增。并且不斷被細胞所降解, -
真核細胞重組蛋白表達及純化服務各種蛋白的純化技巧:天然大分子蛋白分離純化:結(jié)合待分離的蛋白理化性質(zhì),適當選用適合孔徑的分子篩截留分離純化,配合陰離子柱或陽離子柱,使用HLPC分離設備,收取洗脫峰,可以獲得純度95%以上的天然蛋白。天然小肽分離純化:通過分子篩初步截留大分子蛋白,使用大孔樹脂或反向樹脂純化小分子化合物,進一步通過HPLC和MS對小肽分子鑒定,由于小肽分子一般含量較低,獲得的蛋白量較少。未知蛋白混合物分離純化:客戶需告知帶分離蛋白的基本特性,由鐘鼎分離純化,最終通過質(zhì)譜鑒定,活性鑒定
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哺乳動物瞬時表達廣泛地應用于基因產(chǎn)物的快速表達及蛋白質(zhì)的小規(guī)模制備等方面。細胞瞬時轉(zhuǎn)染表達能夠快速靈活的制備重組蛋白,細胞在轉(zhuǎn)染后合適時機即能可收獲并進行分析.在瞬時轉(zhuǎn)染中,重組DNA導入感染性強的細胞系以獲得目的基因暫時高水平的表達。轉(zhuǎn)染的DNA不必整合進宿主染色體,當有大量樣品需要在短時間內(nèi)分析時,尤其是在轉(zhuǎn)染后1到4天內(nèi)收獲細胞,所得溶解產(chǎn)物用于檢測目的基因的表達時,可以采用瞬時轉(zhuǎn)染的方式。哺乳動物瞬時表達適用于生成具有天然結(jié)構(gòu)和活性的哺乳動物蛋白的選用表達平臺,可以實現(xiàn)高水平的翻譯后加工
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賽多培TM大腸桿菌表達培養(yǎng)基CesuperTME.coliExpressionMedium產(chǎn)品簡介賽多培TM大腸桿菌表達培養(yǎng)基是賽爾瑞成研發(fā)的一種適合于大腸桿菌生長和蛋白表達的即用型全成分培養(yǎng)基。使用該培養(yǎng)基,只需一步操作,無需添加IPTG誘導劑,即可收獲含表達蛋白的菌體,與常規(guī)方法相比,對絕大多數(shù)蛋白表達,其菌體生物量和對應的目的蛋白都明顯提高數(shù)倍以上。產(chǎn)品優(yōu)勢1.操作簡單,提高效率直接挑取單菌落或用甘油菌接種,一步操作,然后培養(yǎng)過夜或培養(yǎng)至平臺期收菌,中間不用監(jiān)測生長狀態(tài)(監(jiān)測OD值),不用 -
重組人TSLP實驗原理:用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗TSLP抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗TSLP抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TSLP呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。重組人TSLP試驗操作流程:實驗前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度