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當(dāng)前位置:> 供求商機> CR1001-超級核酸酶(Benzonase Nuclease)
所在地:北京
貨物所在地:北京北京市
更新時間:2024/11/8 21:00:07
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一、產(chǎn)品簡介
超級核酸酶(Benzonase Nuclease)是一種來源于粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens,也稱靈桿菌)的非特異性核酸內(nèi)切酶,也稱全能核酸酶或廣譜核酸酶。該核酸酶可在非常寬泛的條件下降解單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀、天然或變性等各種形式的DNA或RNA,產(chǎn)生長度為3至5個堿基的5'-單磷酸寡核苷酸。
超級核酸酶(Benzonase Nuclease)用途廣泛,可用于在重組蛋白、病毒疫苗、抗體藥物等生物制品生產(chǎn)過程中去除核酸,或用于降低細胞、組織、微生物等蛋白裂解液樣品的粘度等(可以用于化學(xué)破菌而省去超聲儀或高壓均質(zhì)機,或者結(jié)合化學(xué)破菌大幅度減少超聲儀或高壓均質(zhì)機的工作負荷)。
本產(chǎn)品采用我公司自主研發(fā)的技術(shù)平臺表達、純化和制備,分子量約為52.3kDa。超級核酸酶(Benzonase Nuclease)活性部分與Serratia marcescens中的天然核酸內(nèi)切酶氨基酸序列*一致。
二、產(chǎn)品性質(zhì)
來源 | E. coli |
分子量 | 52.3 kDa |
純度 | 不小于 95% ( SDS-PAGE ) |
等電點 | 6.19 |
酶活 | 不小于 200 U/μL |
最適酶活 pH | 8.0-9.2 (工作范圍 pH 6.0-10.0 ) |
最適酶活溫度 | 37℃ (工作范圍 0℃-42℃ ) |
最適輔助因子 | 2mM Mg2+ (工作范圍 1-10 mM ) |
蛋白酶活性殘留 | 未檢出 |
保存緩沖液 | 10mM Tris (pH8.0), 500mM NaCl, 2mM MgCl2, 50% 甘油 |
活性單位定義 | 在 37℃ , pH 8.0 反應(yīng)條件下,在 30 min 內(nèi)*消化 37 μg DNA 成為寡核苷酸的酶量(相當(dāng)于使 △A260 吸收值變化 1.0 )定義為一個活性單( U )。 |
三、產(chǎn)品用途
1)有效去除各種重組蛋白制備過程中的核酸殘留;
2)有效去除病毒疫苗和各種重組病毒中的核酸,以符合國家食藥監(jiān)局相關(guān)指南中關(guān)于核酸污染的要求;
3)有效降低細胞裂解液由于大量核酸存在而導(dǎo)致的粘度過大,以使裂解液易于后續(xù)操作;
4)有效降低大腸桿菌或其它工程菌裂解液粘度,大幅改善蛋白制備過程中菌體裂解液難過濾、難離心的問題,節(jié)約設(shè)備和人力成本;
5)在某些情況下,充分去除核酸可以提高包涵體蛋白的復(fù)性率;
6)在實時定量PCR測定重組病毒滴度時,用于去除病毒包裝細胞的核酸和包裝質(zhì)粒污染;
7)有效防止細胞成團,在細胞培養(yǎng)液中或某些細胞凍存液中加入適量超級核酸酶,可以防止細胞成團,以利于后續(xù)細胞分析和檢測。超級核酸酶沒有蛋白酶的活性殘留,本身也不會對健康細胞造成傷害,因此是防止細胞成團的理想選擇。
8)在二維凝膠電泳(2-DE)的過程中,加入核酸酶可以提高蛋白質(zhì)的分離效率和雙向電泳的分辨率。
四、產(chǎn)品效果
五、運輸和保存方法
低溫運輸(冰袋或干冰),-20℃保存,有效期3年。4℃保存一個月,酶活性沒有明顯變化。
六、常見化學(xué)試劑兼容條件
化學(xué)試劑 | 最佳條件 | 有效條件 |
DTT | 0-100 mM | 可以大于 100 mM |
2-Mercaptoethanol | 0-100mM | 可以大于 100mM |
Triton X-100 | -- | 小于 0.4% |
Urea | -- | 小于 5M |
SDS | -- | 小于 0.05% |
磷酸根離子 | 0-10 mM | 0-100 mM |
單價陽離子(如 Na + , K+ , NH4 + ) | 0-20 mM | 0-150 mM |
(NH4)2SO4 | -- | 小于 100mM |
七、使用方法示例(去除細胞裂解上清中的核酸)
1、樣本準(zhǔn)備
大腸桿菌:離心收集菌體,用PBS或其它緩沖液清洗1次,8,000 rpm離心5 min,收集菌體沉淀。
貼壁細胞:去除培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞,去除上清。
懸浮細胞:離心收集細胞,用PBS清洗細胞,6,000 rpm離心10 min,收集細胞沉淀。
2、樣品處理
將收集到的菌體或細胞沉淀按照質(zhì)量(g)與體積(mL)比1:(10~20) 的比例進行裂解處理,可以在冰上或室溫通過機械或化學(xué)方法裂解細胞。
3、酶的添加
按照250 Units消化1 g細胞沉淀的比例添加超級核酸酶,也可以先進行預(yù)實驗自行選擇添加的酶量,在一定范圍內(nèi)增加酶量,消化所需時間相應(yīng)減少。
4、上清獲取
以12,000 rpm的轉(zhuǎn)速高速離心10-30min,去除沉淀,即獲得菌體或細胞裂解液上清,再進行后續(xù)相關(guān)實驗。
八、注意事項
1)若溶液為高鹽溶液,偏酸性或者偏堿性,含有較高濃度的去垢劑、變性劑,應(yīng)適當(dāng)增加酶的用量或延長孵育時間。盡量按照上表“常見化學(xué)試劑兼容條件"表中的濃度范圍調(diào)整待處理樣品相關(guān)試劑的濃度,以使酶活性處于最大。
2)不建議-80oC保存本產(chǎn)品,也不建議反復(fù)凍融,有可能會降低產(chǎn)品的酶活性,可以適當(dāng)分裝保存于-20oC。
產(chǎn)品目錄
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 目錄價格 |
CR1001 | 超級核酸酶 | 25KU | 400 |
CR1002 | 超級核酸酶 | 50KU | 680 |
CR1003 | 超級核酸酶 | 100KU | 1300 |
本產(chǎn)品僅作為科研試劑使用!
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